簡(jiǎn)介：本文研究了SARS病毒基因組主要編碼的蛋白質(zhì)有RNA聚合酶蛋白聚合酶1A，1B，S蛋白SPIKEPROTEIN，E蛋白SMALLMEMBRANEPROTEIN，N蛋白NUCLEOCAPSIDPROTEIN，主蛋白酶3CLIKEPROTEINASE等，利用先進(jìn)的生物信息學(xué)分析軟件從已知結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)PDB中搜尋到豬冠狀病毒TGEV和人感冒冠狀病毒HCOV主蛋白酶與SARS病毒主蛋白酶序列具有很高相似性，以TGEV的主蛋白酶三維晶體結(jié)構(gòu)為模板來(lái)同源模建了SARS冠狀病毒的主蛋白酶三維結(jié)構(gòu)，分析了其結(jié)構(gòu)和活性位點(diǎn)特征。本文利用同源模建方法得到了S蛋白的三維結(jié)構(gòu)，并利用蛋白質(zhì)對(duì)接軟件得到了S蛋白與其功能性受體ACE2蛋白的結(jié)合模式，從而確定了S蛋白中與受體結(jié)合的關(guān)鍵部位及其結(jié)構(gòu)特征，這為SARS病毒疫苗的研究提供了一些有價(jià)值的線索。

簡(jiǎn)介：華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文脫唾液酸糖蛋白受體介導(dǎo)的雞貧血病毒VP3基因靶向性治療肝癌的研究姓名王宇哲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師屈伸200141華中科技大掌同濟(jì)醫(yī)掌院攻讀博士掌位畢業(yè)論文一2。凋亡的，所以VP3的后兩種特性強(qiáng)有力地表明了VP3作為一種抗腫瘤生物制劑具有極大的應(yīng)用潛力。最近，NOTEBORN小組也驗(yàn)證了CAVVP3的體內(nèi)抑瘤效應(yīng)，進(jìn)一步驗(yàn)證了我們的觀點(diǎn)。基因轉(zhuǎn)移是NNN療中N個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其中目的基因的靶向性作用是制約基因治療的主要因素之一。目前，受體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移逐漸引起人們的重視。它是將偶聯(lián)了受體特異性配體的DNA結(jié)合分子，如多聚左旋賴氨酸POLY．L．LYSINE，PLL，與DNA結(jié)合形成可溶性復(fù)合物，然后利用受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用，將DNA靶向性導(dǎo)入特定的細(xì)胞。配體和受體的特異性結(jié)合以及受體的內(nèi)吞作用是一種生理過(guò)程。因而與其它基因轉(zhuǎn)移技術(shù)相比具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，尤其適用于體內(nèi)的基因轉(zhuǎn)移。WUGY研究小組將肝細(xì)胞表面特有受體，脫唾液酸糖蛋白受體ASIALOGLYCOPROTEINRECEPTOR，ASGPR的天然配體人血清類脫唾液酸粘蛋白ASIALOOROSOMUCOID，ASOR同報(bào)道基因連接一起，在體內(nèi)外證明了ASOR受體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移的肝細(xì)胞靶向性。且以此受體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移將低密度脂蛋白受體LDLR基因?qū)肴狈Υ嘶虻牡母啧パY動(dòng)物模型體內(nèi)，使高酯血癥得到了部分糾正。近幾年該技術(shù)亦成功地在人體內(nèi)應(yīng)用，治療了多例家族性高膽固醇血癥患者。文獻(xiàn)報(bào)道，ASOR受體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移在許多疾病的基因治療，尤其是肝臟酶缺陷有關(guān)的遺傳性疾病的基因治療中發(fā)揮了重要作用，然而將其應(yīng)用于肝癌的基因治療國(guó)內(nèi)、外尚未見(jiàn)報(bào)道。因而，利用ASOR受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用，實(shí)現(xiàn)CAVVP3基因的靶向性轉(zhuǎn)移，研究CAVVP3在體內(nèi)、外特異誘導(dǎo)肝組織中瘤細(xì)胞的凋亡效應(yīng)無(wú)疑具有重要意義。此方面的研究在國(guó)內(nèi)、外均無(wú)類似報(bào)道。本研究無(wú)疑對(duì)肝癌的特異性基因治療提供了一個(gè)新的途徑和思路，若研制成功將對(duì)肝癌患者的臨床治療帶來(lái)福音，而且將來(lái)進(jìn)一步作為產(chǎn)品開(kāi)發(fā)也具有廣闊的市場(chǎng)前景。

簡(jiǎn)介：乙型肝炎病毒的感染不僅引起急慢性病毒性肝炎，而且與肝纖維化、肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，然而對(duì)于HBV感染目前尚無(wú)特效的治療技術(shù)和方法，這主要是由于HBV感染引起的病毒性肝炎發(fā)病機(jī)制還有諸多方面沒(méi)有研究清楚。近年來(lái)，隨著對(duì)HBV致病機(jī)制研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)在HBV致病機(jī)制中存在著其與肝細(xì)胞間復(fù)雜的相互作用關(guān)系。為此，本研究所篩選了肝細(xì)胞內(nèi)能與E抗原相互結(jié)合的蛋白，并將其中一個(gè)未知功能新基因命名為乙型肝炎病毒E抗原結(jié)合蛋白2HBEBP2。本研究即以此為基礎(chǔ)，通過(guò)以下研究?jī)?nèi)容，試圖闡釋該基因的生物學(xué)功能1提取HEPG2細(xì)胞總RNA，利用RTPCR方法在HBEBP2基因的兩端分別引入BAMHI和ECⅠ酶切位點(diǎn)，獲得目的基因片段，連接至PGEMT載體，測(cè)序正確后插入至綠色熒光真核表達(dá)載體PEGFPC1中，轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞，24HR后在熒光倒置顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞核出現(xiàn)明顯的綠色熒光信號(hào)，提示HBENP2主要定位于胞核內(nèi)。2利用相同方法將引入ECⅠ和SACⅠ酶切位點(diǎn)的HBEBP2基因片段插入至原核表達(dá)載體PET32A中，轉(zhuǎn)化BL21宿主菌，1MMMLIPTG、37℃誘導(dǎo)45HR獲得了帶有組氨酸標(biāo)簽的重組融合蛋白的優(yōu)化表達(dá)。隨后應(yīng)用WESTERNBLOT對(duì)表達(dá)蛋白的特異性進(jìn)行了驗(yàn)證。3將引入ECⅠ和BAMHⅠ酶切位點(diǎn)的HBEBP2基因片段插入至酵母細(xì)胞表達(dá)載體PGBKT7中，轉(zhuǎn)化AH109酵母菌株并獲得表達(dá)。再與含有肝細(xì)胞文庫(kù)質(zhì)粒的Y187酵母菌株配合，進(jìn)行酵母雙雜交篩選獲得與HBEBP2相互結(jié)合的已知功能蛋白4種，包括人線粒體蛋白基因、人Α2糖蛋白1、人甘露糖P長(zhǎng)醇利用缺陷1基因和人絲氨酸蛋白酶抑制劑等蛋白基因。結(jié)果提示該蛋白可能與糖基化作用、脂類代謝、細(xì)胞增殖等密切相關(guān)。此外還篩選得到2個(gè)新基因，分別命名為HBEBP2結(jié)合蛋白BHBEBP2BPBGENBANKACEESSIONDQ499598和結(jié)合蛋白CITBEBP2BPCGENBANKAEEESSIONDQ499599。4隨后，我們又對(duì)HBEBP2BPB進(jìn)行了克隆化研究，并用生物信息學(xué)方法對(duì)其作了進(jìn)一步分析。以上結(jié)果，對(duì)深入研究HBEBP2生物學(xué)功能的后續(xù)工作奠定了基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)角膜內(nèi)皮炎淚液及房水中單皰病毒DNA姓名范松濤申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)眼科學(xué)指導(dǎo)教師孫洪臣200151率為O，二者有顯著性差異PO05；16例角膜內(nèi)皮炎淚液中3例檢測(cè)到HSVIDNA，陽(yáng)性率為1875％，20例老年性白內(nèi)障對(duì)照組淚液中1例檢測(cè)到HSVIDNA，陽(yáng)性率為5％，二者無(wú)顯著性差異PO05；角膜內(nèi)皮炎患眼房水中檢測(cè)到HSVIDNA的陽(yáng)性率6875％與淚液中檢測(cè)到HSVIDNA、的陽(yáng)性率187596有顯著性差異P005。4／結(jié)論用PCR技術(shù)檢測(cè)角膜內(nèi)皮炎房水中單皰病毒DNA可以對(duì)角膜內(nèi)皮炎做出病原學(xué)診斷，并有早期、快速的優(yōu)點(diǎn)，可進(jìn)一步指導(dǎo)臨床治療；用PCR技術(shù)檢測(cè)角膜內(nèi)皮炎淚液中單皰病毒DNA雖然操作方便，患者也易接受，但其陽(yáng)性率低187596，與房水檢測(cè)陽(yáng)性率6875％有顯著性差異，不足以診斷角膜內(nèi)皮炎本研究觀察病例較少16例且未設(shè)計(jì)其它相關(guān)病毒的特定引物來(lái)進(jìn)行特異性擴(kuò)增，故所得結(jié)論僅限于單皰病毒，是否有其他感染原，需進(jìn)一步研究。關(guān)鍵詞角膜內(nèi)皮炎聚合酶鏈反應(yīng)單純皰疹病毒

簡(jiǎn)介：該論文主要研究了漢坦病毒疫苗株Z10和Z37核蛋白體內(nèi)、體外表達(dá)核蛋白與基因組末端反向重復(fù)序列相互作用以及核蛋白對(duì)鼠源性巨噬細(xì)胞生長(zhǎng)的影響核蛋白相對(duì)保守常作為漢坦病毒分子進(jìn)化親緣性分析的依據(jù)為了解漢坦病毒疫苗株Z10與Z37基因分型及與其他毒株在進(jìn)化上的親緣性克隆并序列測(cè)定了Z10和Z37核蛋白全基因?yàn)榱双@得純化的可溶性重組核蛋白構(gòu)建了Z10和Z37株核蛋白原核表達(dá)載體并在大腸桿菌中表達(dá)我們發(fā)現(xiàn)在較低的溫度18℃和較低濃度IPTG100MM條件下誘導(dǎo)表達(dá)過(guò)夜可提高可溶性核蛋白的產(chǎn)量為了解內(nèi)源性核蛋白的表達(dá)及細(xì)胞內(nèi)的分布情況構(gòu)建了漢坦病毒Z10株核蛋白基因與鼠干細(xì)胞反轉(zhuǎn)錄病毒MSCV重組載體通過(guò)磷酸鈣轉(zhuǎn)染法導(dǎo)入產(chǎn)病毒的包裝細(xì)胞系BOSC23中產(chǎn)生完整的重組MSCVFLAGNP病毒然后以重組病毒直接感染NIH3T3細(xì)胞利用PUROMYCIN對(duì)感染細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)壓力篩選獲得了轉(zhuǎn)核蛋白抗性細(xì)胞互補(bǔ)可形成雙鏈發(fā)夾結(jié)構(gòu)為了研究該雙鏈結(jié)構(gòu)在核蛋白包裝病毒基因組RNA中的作用與功能以T4DNA激酶同位素標(biāo)記一對(duì)人工合成互補(bǔ)的18個(gè)核苷酸反向重復(fù)序列制備雙鏈探針以模擬基因片段末端反向重復(fù)序列形成的雙鏈發(fā)夾結(jié)構(gòu)為了解核蛋白在漢坦病毒感染巨噬細(xì)胞時(shí)的作用分析了Z10和Z37核蛋白細(xì)胞外刺激或細(xì)胞內(nèi)大量表達(dá)對(duì)鼠源性巨噬細(xì)胞系J774的影響

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多巨細(xì)胞病毒感染致室性心律失常與射頻消融的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：背景A型流感病毒NONSTRUCTRUALPROTEIN1NS1能與宿主細(xì)胞內(nèi)眾多蛋白相互作用表現(xiàn)為對(duì)宿主的免疫抑制作用并影響信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和蛋白質(zhì)合成。NS1蛋白含有約230個(gè)氨基酸片段C末端4個(gè)氨基酸被稱為PDZ結(jié)合基序PDZBINDINGMOTIF。突觸后密度蛋白POSTSYNAPTICDENSITYPROTEINSPSD95主要存在于神經(jīng)元細(xì)胞含有3個(gè)PDZ結(jié)構(gòu)區(qū)域PDZDOMAIN。PSD95作為神經(jīng)元細(xì)胞鷹架蛋白結(jié)合了眾多功能蛋白。PSD95在神經(jīng)元細(xì)胞離子平衡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)N甲基D門(mén)冬氨酸受體NMETHYLDASPARTATERECEPTNMDAR聚集等方面均發(fā)揮著重要作用。目的為了研究A型流感病毒NS1與PSD95蛋白之間存在的相互作用及不同亞型流感病毒NS1與PSD95相互作用的差異檢測(cè)這兩種蛋白結(jié)合作用對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞功能的影響。利用基因克隆技術(shù)通過(guò)GSTPULLDOWN酵母雙雜交免疫共沉淀免疫熒光定位等技術(shù)來(lái)確定不同亞型流感病毒NS1蛋白與神經(jīng)元突觸后密度蛋白PSD95之間的相互作用。通過(guò)測(cè)定NITRICOXIDENO含量變化來(lái)證實(shí)NS1與PSD95相互結(jié)合后對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞功能的影響。方法通過(guò)GSTPULLDOWN證實(shí)NS1與PSD95在體外的相互結(jié)合酵母雙雜交及Α半乳糖苷酶活性測(cè)定模擬NS1與PSD95在體內(nèi)的相互作用免疫共沉淀免疫熒光定位確定NS1與PSD95在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)相互結(jié)合情況通過(guò)GRIESSREAGENT檢測(cè)亞硝酸鹽確定細(xì)胞內(nèi)NO產(chǎn)物含量。結(jié)果ASHANTOU1692006ST169H1N1、ASHANTOU60206ST602H3N2、AGUANGDONG12005GD05H5N1、AQUAILHONGKONGG197G1H9N2各亞型病毒中僅H5N1亞型流感病毒的NS1NS51能夠與PSD95相互作用酵母雙雜交XGALΑ半乳糖苷酶活性檢測(cè)中轉(zhuǎn)染PGADNS51PGBKPSD95的酵母菌AH109能在ADELEUTRPHIS培養(yǎng)基QUADRUPLEOUTMEDIUMQDO平板上生長(zhǎng)XGAL強(qiáng)陽(yáng)性Α半乳糖苷酶活性單位為3504±0082MILLUNITML轉(zhuǎn)染PGADNS11PGBKPSD95的AH109在QDO僅極少菌落生長(zhǎng)XGAL弱陽(yáng)性Α半乳糖苷酶活性單位為0184±0112MILLUNITML陽(yáng)性對(duì)照1252±0065MILLUNITML陰性對(duì)照0061±0023MILLUNITMLGSTPULLDOWN免疫共沉淀試驗(yàn)中僅NS51與PSD95存在相互結(jié)合NO產(chǎn)物檢測(cè)確定NS51與PSD95相互作用后對(duì)神經(jīng)元功能的影響。結(jié)果表明使用慢病毒LENTIVIRUSNS51感染大鼠海馬神經(jīng)元NO產(chǎn)生被抑制PCDNANS51PCDNANS11分別轉(zhuǎn)染人神經(jīng)瘤細(xì)胞系SHSY5YNS51組NO產(chǎn)生被抑制NS11組NO產(chǎn)生顯著增加。結(jié)論實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了H5N1亞型流感病毒NS1與神經(jīng)元突觸后密度蛋白PSD95之間存在相互作用而其它亞型NS11NS32NS92則不能與PSD95結(jié)合說(shuō)明不同亞型流感病毒與PSD95結(jié)合特性上存在差異另外NS1與神經(jīng)元PSD95相互結(jié)合能夠抑制神經(jīng)元NO的產(chǎn)生。材料與方法選取由本實(shí)驗(yàn)室提供的A型流感病毒ASHANTOU1692006ST169H1N1ASHANTOU60206ST602H3N2AGUANGDONG12005GD05H5N1AQUAILHONGKONGG197G1H9N2選用流感病毒分離鑒定細(xì)胞系MADINDARBYCANINEKIDNEYMDCK細(xì)胞通過(guò)空斑形成試驗(yàn)PLAQUEFMINGASSAY得到流感病毒ASHANTOU1692006ST169、ASHANTOU60206ST602、AGUANGDONG12005GD05、AQUAILHONGKONGG197G1的空斑形成單位PLAQUEFMINGUNITPFU分別為12107PFUML、42107PFUML、11106PFUML、10106PFUMLMDCK細(xì)胞使用含10％FBS的DMEM進(jìn)行培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞則使用含10?S1?7的NEUROBASAL培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)構(gòu)建相應(yīng)載體PGADNS11PGADNS32PGADNS51PGADNS92PGBKPSD95FLAGPSD95PCDNANS11PCDNANS32PCDNANS51PCDNANS92PCDNAPSD95慢病毒LENTIVIRUSNS51NS11表示ST169的NS1NS32表示ST602的NS1NS51表示GD05的NS1NS92表示G1的NS1進(jìn)行包括GSTPULLDOWN、酵母雙雜交、免疫共沉淀COIP在內(nèi)的試驗(yàn)以檢測(cè)不同亞型流感病毒NS1與突觸后密度蛋白PSD95之間的相互作用其它相關(guān)試劑包括兔抗PSD95抗體小鼠抗NS1抗體PROTEINGMAGICBEADSHRP標(biāo)記的二抗以及CY3和ALEXA488標(biāo)記的羊抗兔羊抗小鼠二抗使用碧云天的總NITRICOXIDENO檢測(cè)試劑盒檢測(cè)NS1與PSD95相互結(jié)合后對(duì)細(xì)胞內(nèi)NO含量的影響。結(jié)果1空斑形成試驗(yàn)測(cè)得ST169H1N1、ST602H3N2、GD05H5N1、G1H9N2的空斑形成單位PFU分別為12107PFUML42107PFUML11106PFUML10106PFUML2酵母雙雜交試驗(yàn)表明流感病毒NS51與PSD95能夠相互結(jié)合NS11與PSD95不存在或僅存在微弱的相互結(jié)合NS32NS92與PSD95則不存在相互結(jié)合XGAL試驗(yàn)表明NS51NS11與PSD95能夠相互作用而NS32NS92與PSD95則不存在相互作用Α半乳糖苷酶活性單位檢測(cè)表明NS51與PSD95能夠相互作用3GSTPULLDOWN結(jié)果顯示NS51與PSD95能夠相互結(jié)合而NS11與PSD95不存在相互結(jié)合4COIP結(jié)果顯示僅NS51與PSD95存在相互結(jié)合5免疫熒光結(jié)果表明神經(jīng)元SHSY5Y細(xì)胞中NS51與PSD95存在共定位6NO檢測(cè)顯示慢病毒LENTIVIRUSNS51感染神經(jīng)元細(xì)胞NS51能夠抑制NO產(chǎn)物的產(chǎn)生SHSY5Y細(xì)胞中NS51能夠抑制NO產(chǎn)物的產(chǎn)生而NS11則促進(jìn)NO產(chǎn)物的產(chǎn)生結(jié)論1不同亞型流感病毒NS1與PSD95存在不同的結(jié)合特性NS51與PSD95能夠相互結(jié)合而其它亞型流感病毒NS1NS11NS32NS92與PSD95不存在相互結(jié)合2流感病毒NS1與PSD95蛋白的相互結(jié)合能夠抑制人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系SHSY5Y及神經(jīng)元細(xì)胞中NO的產(chǎn)生和釋放。

簡(jiǎn)介：第一部分、2007年9月～2011年8月湖南地區(qū)急性下呼吸道感染住院患兒腺病毒流行病學(xué)調(diào)查目的連續(xù)4年監(jiān)測(cè)湖南地區(qū)兒童急性下呼吸道感染ACUTELOWRESPIRATYTRACTINFECTION，ALRTI中腺病毒HUMANADENOVIRUSADV的感染情況，揭示不同年份ADV在湖南地區(qū)所致兒童ALRTI的臨床流行病學(xué)特征。對(duì)象及方法12007年9月～2011年8月收集湖南省人民醫(yī)院兒科醫(yī)學(xué)中心診斷為ALRTI的住院患兒鼻咽抽吸物NASOPHARYNGEAASPIRATESSAMPLES，NPAS標(biāo)本。2采用聚合酶鏈反應(yīng)PCR，對(duì)NPAS標(biāo)本進(jìn)行ADV病毒檢測(cè)。將陽(yáng)性PCR產(chǎn)物直接測(cè)序，弱陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行膠回收，連接，轉(zhuǎn)化，挑克隆，然后將菌液送測(cè)序。所得測(cè)序結(jié)果與美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)中心NCBIGENEBANK中的序列進(jìn)行BLAST比對(duì)證實(shí)。3對(duì)ADV在兒童ALRTI中的流行病學(xué)特點(diǎn)進(jìn)行分析。結(jié)果12007年9月～2011年8月共收集3140例患兒的NPAS標(biāo)本，242份ADV檢出陽(yáng)性，總檢出率為771％。2242例ADV檢測(cè)陽(yáng)性患兒①平均年齡為25月，3～4歲患兒檢出率高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。P＜001②男性檢出144例719％，女性檢出98例901％，男女性別之比為147∶1，性別之間ADV陽(yáng)性檢出率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞005③研究期間ADV全年均有檢出，發(fā)病高峰期在每年的4～8月，11月份。四季檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜001，以夏季為高。研究期間檢出率逐年增加。結(jié)論1ADV是2007年9月～2011年8月湖南地區(qū)兒童ALRTI的重要病毒病原之一，檢出率逐年上升。2本資料中3～4歲患兒檢出率高，在各年齡段之間檢出率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異檢出率在性別之間比較無(wú)差異以夏季檢出率高。3ADV陽(yáng)性的重癥肺炎以3歲以下嬰幼兒多見(jiàn)。第二部分、2007年9月～2011年8月湖南地區(qū)急性下呼吸道感染住院患兒腺病毒分子流行病學(xué)調(diào)查目的了解2007年9月～2011年8月ADV在湖南地區(qū)ALRTI住院兒童中的分子流行病學(xué)特點(diǎn)。對(duì)象及方法1242例ADV檢出陽(yáng)性的ALRTI住院兒童NPAS標(biāo)本。2使用2對(duì)可擴(kuò)增所有ADV血清型的通用引物，對(duì)ADV陽(yáng)性的NPAS標(biāo)本再次進(jìn)行巢氏擴(kuò)增ADVHEXONLOOP1基因片段。將巢式PCR陽(yáng)性擴(kuò)增產(chǎn)物直接測(cè)序，弱陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行膠回收，連接，轉(zhuǎn)化，挑克隆，然后將菌液送測(cè)序，結(jié)果與GENBANK上的序列比對(duì)，確定其血清型。3對(duì)ADV在兒童ALRTI中的分子流行病學(xué)特點(diǎn)進(jìn)行分析。結(jié)果1242份ADV陽(yáng)性標(biāo)本中，共檢出血清型11個(gè)，其中半數(shù)以上為3型132242，5454％，其次依次為7型65份，占2686％，1型22份，占909％，2型10份，占413％，6型5份，占207％，11型3份，占124％，5型，21型，37型，40型，41型各1份，占041％。3型是一直是研究期間主要優(yōu)勢(shì)血清型而2010年9月～2011年8月7型檢出增多，與3型一起成為該年度優(yōu)勢(shì)血清型。22010年9月～2011年8月7型檢出增多，該年度7型檢出陽(yáng)性的ALRTI其熱程，住院時(shí)間，需要機(jī)械通氣比例，需要住ICU的比例等均高于其他型別。3型以及7型在重癥肺炎患兒中所占比例重，以7型更為常見(jiàn)。3所檢出血清型中①性別檢出率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義②1～3型ADV，年齡檢出差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜001③3型秋季多見(jiàn)，7型夏季多見(jiàn)（P均＜001），其余血清型無(wú)季節(jié)流行特點(diǎn)。4結(jié)論1研究期間，共檢出ADV血清型11個(gè)，2007年9月～2010年8月3型是主要優(yōu)勢(shì)血清型。2010年9月2011年8月以3、7型為主要優(yōu)勢(shì)血清型。2不同血清型具有各自分子流行病學(xué)特點(diǎn)。3ADV陽(yáng)性重癥肺炎患兒中以3型、7型常見(jiàn)，7型檢出陽(yáng)性的ALRTI病情重于其他型別。第三部分、重癥腺病毒肺炎的臨床特點(diǎn)及診治體會(huì)目的提高對(duì)腺病毒肺炎的認(rèn)識(shí)，對(duì)重癥腺病毒肺炎的臨床特點(diǎn)以及診治情況進(jìn)行分析總結(jié)。對(duì)象及方法1研究對(duì)象2007年9月～2011年8月在湖南省人民醫(yī)院兒科醫(yī)學(xué)中心住院的65例確診為重癥腺病毒肺炎患兒。同期確診的28例難治性支原體肺炎以及13例典型川崎病患兒。2方法收集以上65例患兒臨床資料包括包括一般情況，臨床表現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)室檢查，影像學(xué)檢查，治療，預(yù)后等），對(duì)其臨床特點(diǎn)及診治情況進(jìn)行分析。并與28例難治性支原體肺炎患兒，13例典型川崎病患兒的臨床表現(xiàn)進(jìn)行比較。結(jié)果165例重癥腺病毒肺炎患兒平均年齡1717月，最小1月，最大120月。5歲以下63例，占9692％，其中6月～2歲38例。65例患兒中男性41例，女性24例，男女性別之比為171∶1。2臨床表現(xiàn)所有患兒均有咳嗽、肺部羅音，其次為持續(xù)高熱9692％，6365、熱程長(zhǎng)（28例熱程＞7天，20例熱程＞14天）、喘息5165，7846％、肝腫大5231％，3465、脾腫大2769％，1865、川崎病樣改變（口腔黏膜充血、淺表淋巴結(jié)腫大、楊梅舌、手足硬腫、蛻皮）19例2923％，1965等。并出現(xiàn)合并癥，其中合并呼吸衰竭12例1846％，中毒性肝炎10例1538％，中毒性腦病12例1846％，中毒性心肌炎16例2462％，中度貧血17例2615％，心力衰竭6例923％，死亡4例。3影像學(xué)特點(diǎn)為由早期肺部斑片狀影迅速融合成大片影，雙肺多灶多葉侵潤(rùn)22例，左肺實(shí)變19例，右肺實(shí)變8例，其中雙肺多灶多葉侵潤(rùn)22例中以左肺實(shí)變明顯，實(shí)變以外的肺組織可有明顯氣腫節(jié)段性肺不張8例胸腔積液氣胸12例，皮下氣腫1例，肺門(mén)或縱隔淋巴結(jié)腫1例。4同難治性支原體肺炎相比，重癥腺病毒肺炎發(fā)病年齡以嬰幼兒多見(jiàn)，熱程＞14天發(fā)生率多，肝功能受損、意識(shí)改變、貧血以及肝脾增大表現(xiàn)較難治性支原體更常見(jiàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005。并可出現(xiàn)川崎病樣改變，合并癥發(fā)生率高。纖維支氣管鏡鏡下粘膜糜爛剝脫發(fā)生率較對(duì)照組高。兩組患兒均有肺部實(shí)變，但是重癥腺病毒肺炎肺部實(shí)變以左下肺多見(jiàn)，而難治性支原體肺炎患兒以右下肺以及左舌葉多見(jiàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005。519例不同程度川崎病樣改變的重癥腺病毒肺炎患兒同13例典型川崎病患兒臨床對(duì)比研究發(fā)現(xiàn)，兩組患兒均有高熱，嬰幼兒多見(jiàn)，可見(jiàn)楊梅舌，口腔黏膜充血，肝功能受損。但是重癥腺病毒肺炎患兒較對(duì)照組相比更易出現(xiàn)貧血，肺部大片實(shí)變表現(xiàn)。而淺表淋巴結(jié)腫大、手足硬腫、皮疹、肛周脫皮、冠脈擴(kuò)張、白細(xì)胞、CRP以及ESR升高在對(duì)照組更常見(jiàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005。典型川崎病患兒對(duì)丙種球蛋白沖擊治療效果好。6纖維支氣管鏡下檢查發(fā)現(xiàn)粘膜糜爛剝脫的患兒容易出現(xiàn)呼吸功能不全及肺外心、腦、肝并發(fā)癥。765例患兒經(jīng)綜合治療后，大部分好轉(zhuǎn)出院，4例死亡。32例患兒1年的隨訪中發(fā)現(xiàn)患兒可遺留不同程度后遺癥表現(xiàn)為肺不張2例，閉塞性細(xì)支氣管炎8例，肺氣腫2例。結(jié)論重癥腺病毒肺炎具有以下特征年齡多見(jiàn)于6月到24月之間患兒持續(xù)高熱，咳喘較劇烈，感染中毒癥狀重，肝腫大，肺部由早期斑片狀影迅速融合成大片影，并容易出現(xiàn)呼吸功能不全及肺外并發(fā)癥。有著與與細(xì)菌性肺炎、難治性支原體肺炎不同的臨床特點(diǎn)。

簡(jiǎn)介：該研究首先采用RTPCR方法分別擴(kuò)增了中國(guó)登革2型病毒43株E蛋白III區(qū)的基因和4型病素B5株E蛋白III區(qū)基因然后將其融合并克隆到原核表達(dá)載體PYX102D24中隨后在減毒鼠傷寒沙門(mén)氏菌平衡致死系統(tǒng)中進(jìn)行表達(dá)試圖構(gòu)建新型雙價(jià)登革疫苗該研究對(duì)含有中國(guó)登革24型病毒株嵌合E基因片段的重組質(zhì)粒DNA的免疫原性進(jìn)行了初步觀察為了構(gòu)建中國(guó)登革24型病毒株嵌合的E基因應(yīng)首先確定病毒E基因的核苷酸序列同源進(jìn)化分析表明中國(guó)D4B5株的基因型為I型與登革型病毒菲律賓分離株親緣關(guān)系較近這是首次報(bào)道的中國(guó)登革4型病毒分離株基因組全序列該研究對(duì)了解登革病毒基因結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系研制新型登革多價(jià)疫苗具有一定的意義

簡(jiǎn)介：該論文分為三部分第一部分對(duì)中藥復(fù)方的化學(xué)研究現(xiàn)狀進(jìn)行綜述對(duì)近10年一有關(guān)銀翹散的研究概況包括其組方中各單味藥的化學(xué)成分以及全方現(xiàn)代藥理學(xué)研究進(jìn)展進(jìn)行綜述共引用文獻(xiàn)191篇第二部分詳細(xì)論述了銀翹散抗流感病毒有效部位群EFY的物質(zhì)基礎(chǔ)化學(xué)成分的提取、分離及結(jié)構(gòu)鑒定并對(duì)所得的部分化合物進(jìn)行了初步的活性測(cè)定探討了EFY的HPLC指紋圖譜建立可以此作為EFY質(zhì)量控制的定性指標(biāo)對(duì)EFY中的主要化學(xué)成分類別及指標(biāo)性成分進(jìn)行了定量分析可以此作為對(duì)EFY質(zhì)量控制的定量指標(biāo)同時(shí)也探討了組方中各單味藥對(duì)EFY的貢獻(xiàn)第三部分采用不同分組方案以探討EFY抗病毒效應(yīng)的可能機(jī)理

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多人類新型皰疹病毒(HumanHerpesvirus)感染及其對(duì)宿主基因組表達(dá)狀態(tài)的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：目的1研究不同地區(qū)旱獺對(duì)WHV的易感性了解不同毒株、不同劑量的WHV接種旱獺后的自然經(jīng)過(guò)完善WHV感染的旱獺模型。2建立旱獺T淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答的檢測(cè)方法。3研究恩替卡韋聯(lián)合DNA疫苗PWHCIM對(duì)WHV感染的早期干預(yù)作用。方法1捕獲來(lái)自不同地區(qū)的旱獺靜脈接種含有WHV病毒的血清觀察其對(duì)WHV的易感性用不同的WHV毒株接種易感地區(qū)的旱獺觀察不同毒株的影響分別用高中低劑量的WHV59毒株接種易感地區(qū)的旱獺觀察不同劑量的WHV接種后的自然經(jīng)過(guò)。2分離旱獺PBMC建立旱獺T細(xì)胞應(yīng)答的檢測(cè)方法包括CFSE染色檢測(cè)旱獺PBMC增殖CD107A檢測(cè)旱獺特異性CTL應(yīng)答PD1PDL1FOXP3染色及其免疫應(yīng)答相關(guān)分子MRNA表達(dá)的REALTIMERTPCR的方法。3野外捕獲的成年旱獺24只體重在23KG。經(jīng)足背靜脈接種含有WHV59病毒的血清病毒接種后24小時(shí)18只旱獺分別經(jīng)過(guò)如下三種處理口服抗病毒藥物恩替卡韋05MGKGDAY持續(xù)服用8周在接種病毒后的第147周用表達(dá)WHV核心抗原的質(zhì)粒免疫口服恩替卡韋聯(lián)合質(zhì)粒免疫。余下6只旱獺作為空白對(duì)照。20周后旱獺接種WHV0908毒株。選擇2只健康旱獺作為此次病毒接種的對(duì)照。應(yīng)用ELISA、REALTIMEPCR檢測(cè)旱獺血清WHV感染標(biāo)志物的動(dòng)態(tài)變化WHSAG、WHSAB、WHCAB和WHVDNA。REALTIMERTPCR檢測(cè)旱獺PBMC中免疫應(yīng)答相關(guān)分子的表達(dá)。結(jié)果1來(lái)自13地區(qū)的喜馬拉雅旱獺對(duì)WHV易感病毒呈現(xiàn)高復(fù)制WHV59毒株使喜馬拉雅旱獺出現(xiàn)急性感染而WHV59的傳代毒株STOCK0908和STOCK0925使旱獺同樣出現(xiàn)急性感染中劑量WHV59接種后旱獺出現(xiàn)病毒血癥的時(shí)間延遲而低劑量WHV接種旱獺后不能出現(xiàn)病毒血癥。2新鮮分離的旱獺PBMC進(jìn)行CFSE染色5ΜGML的CONA刺激旱獺淋巴細(xì)胞5天CFSEDIMCD4細(xì)胞百分比高達(dá)9215％。新鮮分離急性WHV感染旱獺的PBMC2ΜGMLWHC96110的肽段特異性刺激3天后CD3CD4CD107A的表達(dá)為398％相比2ΜGMLCMV無(wú)關(guān)多肽刺激085％和空白對(duì)照067％有明顯的增高。在病毒血癥高峰期CD4細(xì)胞的PD1表達(dá)達(dá)到高峰陽(yáng)性細(xì)胞百分比達(dá)到1377％CD4細(xì)胞的FOXP3的表達(dá)為444％PDL1在病毒血癥晚期CD4和CD4T細(xì)胞均有短暫上調(diào)其百分比分別為217％和605％病毒清除后降至正常水平。324只成年旱獺初次WHV感染后所有僅用DNA疫苗免疫的旱獺均出現(xiàn)病毒血癥和核心抗體與未處理的對(duì)照旱獺相似。除僅用恩替卡韋處理的2只旱獺未出現(xiàn)WHCAB外恩替卡韋聯(lián)合質(zhì)粒免疫及僅用恩替卡韋處理的所有旱獺均出現(xiàn)WHCAB而未出現(xiàn)病毒血癥。再次病毒接種后所有的質(zhì)粒免疫旱獺恩替卡韋聯(lián)合質(zhì)粒免疫的旱獺以及未處理的對(duì)照動(dòng)物及其部分僅用恩替卡韋處理的旱獺46均不出現(xiàn)病毒血癥。結(jié)論1旱獺的遺傳背景及病毒的接種劑量影響WHV感染的結(jié)局傳代病毒接種產(chǎn)生與原代病毒感染類此的感染結(jié)局。2建立了旱獺T細(xì)胞應(yīng)答的檢測(cè)方法為旱獺WHV感染模型應(yīng)用于HBV感染的免疫發(fā)病機(jī)制研究及評(píng)估免疫治療策略提供研究手段。3早期應(yīng)用抗病毒藥物和或抗病毒藥物聯(lián)合DNA疫苗可以抵御WHV的初次感染且部分或全部旱獺產(chǎn)生了有效的保護(hù)性免疫應(yīng)答可以抵御WHV的再次感染。本研究的創(chuàng)新點(diǎn)及意義1旱獺廣泛分布在我國(guó)西北特別是青藏高原與土撥鼠種系線粒體DNA序列分析發(fā)生十分接近近年已經(jīng)報(bào)道中國(guó)旱獺對(duì)WHV有易感性因此WHV感染旱獺模型非常適合于研究嗜肝病毒的急慢性感染。2首次在旱獺WHV感染模型體內(nèi)建立T淋巴細(xì)胞應(yīng)答的檢測(cè)方法包括CFSE染色檢測(cè)淋巴細(xì)胞增殖CD107A及流式細(xì)胞術(shù)分析特異性CTL應(yīng)答REALTIMERTPCR檢測(cè)細(xì)胞因子表達(dá)為旱獺模型的進(jìn)一步推廣應(yīng)用提供研究手段。3首次利用WHV感染旱獺模型研究早期應(yīng)用抗病毒藥物和或抗病毒藥物聯(lián)合DNA疫苗對(duì)WHV感染過(guò)程的影響為探討HBV感染后的早期免疫應(yīng)答及保護(hù)性免疫應(yīng)答的產(chǎn)生提供重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)并為HBV意外或針刺暴露者提供新的干預(yù)方案。

簡(jiǎn)介：目的巨噬細(xì)胞炎性蛋白1?。∕IP1?。┦勤吇蜃又蠧C亞家族成員，可特異性地趨化單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞向炎癥部位遷移，參與許多炎癥性疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。本實(shí)驗(yàn)研究MIP1Α在病毒性心肌炎（VM）小鼠心肌和血清中表達(dá)的動(dòng)力學(xué)特征，探討其在VM發(fā)病學(xué)中的作用。方法取BALBC小鼠75只，隨機(jī)分為兩組，心肌炎組65只，對(duì)照組10只。心肌炎組小鼠每只腹腔注射01ML內(nèi)含1102TCID50柯薩奇B3病毒（CVB3）的EAGLE’S培養(yǎng)液，對(duì)照組小鼠每只腹腔注射不含病毒的EAGLE’S培養(yǎng)液01ML。心肌炎組分別于接種病毒后3、7、15、30D隨機(jī)取10只小鼠，對(duì)照組小鼠于接種后30D，稱體重（BW）后處死，摘取心臟并稱重（HW），計(jì)算HWBW，并留取血清標(biāo)本。HE染色觀察心肌病理改變，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RTPCR）及WESTERNBLOTTING分別檢測(cè)各組小鼠心肌MIP1ΑMRNA及蛋白表達(dá)，用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)血清MIP1Α濃度及心肌白細(xì)胞介素1Β（IL1Β）、腫瘤壞死因子Α（TNF?。┖?，并對(duì)心肌炎組MIP1Α蛋白表達(dá)及血清MIP1Α濃度與心肌病變積分進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果1心肌炎組小鼠死亡率為3846％（2565），對(duì)照組小鼠無(wú)死亡。2對(duì)照組小鼠心肌組織形態(tài)正常；心肌炎組感染后3D心肌無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，7、15、30D心肌組織均出現(xiàn)心肌壞死、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等病理改變，其中以7D最明顯。3心肌炎組730D各時(shí)點(diǎn)HWBW均明顯高于對(duì)照組，而3D與對(duì)照組比較，差異無(wú)顯著性。4心肌炎組接種病毒后7、15、30D血清MIP1Α濃度均顯著高于對(duì)照組，而3D與對(duì)照組比較，差異無(wú)顯著性。5對(duì)照組小鼠心肌組織有一定量的MIP1ΑMRNA表達(dá)，心肌炎組接種病毒后7、15、30D其表達(dá)水平升高，與對(duì)照組比較，差異均有顯著性，3D與對(duì)照組相比變化不明顯。6對(duì)照組MIP1Α蛋白呈弱表達(dá)，心肌炎組小鼠于感染后7DMIP1Α表達(dá)最明顯，1530D其表達(dá)逐漸下降，但仍高于對(duì)照組，而3D與對(duì)照組比較，差異無(wú)顯著性。7心肌MIP1Α蛋白表達(dá)水平與心肌病理積分的相關(guān)性心肌炎組心肌MIP1Α蛋白表達(dá)水平與心肌病理積分呈顯著正相關(guān)。8血清MIP1Α濃度與心肌病理積分的相關(guān)性心肌炎組小鼠血清MIP1Α濃度與心肌病理積分呈顯著正相關(guān)。9心肌炎組730D各時(shí)點(diǎn)心肌IL1Β、TNFΑ含量較對(duì)照組顯著升高，但3D與對(duì)照組比較，差異無(wú)顯著性。結(jié)論1MIP1Α可能參與VM發(fā)病過(guò)程，其機(jī)制可能與促進(jìn)炎癥細(xì)胞向心肌浸潤(rùn)及增加IL1Β、TNFΑ分泌有關(guān)；2血清MIP1Α濃度能反映心肌炎的嚴(yán)重程度，可作為心肌炎病情判斷的一個(gè)血清學(xué)指標(biāo)。

簡(jiǎn)介：目的構(gòu)建編碼縫隙連接蛋白CONNEXIN30CX30的致病基因GJB6及其3種突變體的慢病毒過(guò)表達(dá)載體，并分析其在人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞HACAT中的表達(dá)。資料與方法構(gòu)建GJB6基因及其突變體G11R、A88V、V37E的過(guò)表達(dá)慢病毒載體，轉(zhuǎn)染入293T細(xì)胞，應(yīng)用熒光倒置顯微鏡、REALTIME定量PCR法QPCR、WESTERNBLOT等檢測(cè)其表達(dá)情況，并轉(zhuǎn)染HACAT細(xì)胞，在熒光倒置顯微鏡下觀察熒光表達(dá)及蛋白的初步定位。結(jié)果成功構(gòu)建了該基因野生型及突變體慢病毒表達(dá)載體，并將G11R和A88V突變體成功轉(zhuǎn)染HACAT細(xì)胞。構(gòu)建及轉(zhuǎn)染過(guò)程中發(fā)現(xiàn)野生型重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后有強(qiáng)熒光顯示，WB檢測(cè)強(qiáng)陽(yáng)性條帶3種突變型重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后，A88V突變型轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)觀察到較強(qiáng)熒光，G11R有弱熒光，而V37E突變型未觀察到熒光或較弱，但WB檢測(cè)均有弱陽(yáng)性條帶，說(shuō)明目的基因有表達(dá)但較野生型低。將構(gòu)建的G11R和A88V突變體慢病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染HACAT細(xì)胞，可觀察到弱的熒光V37E突變型未觀察到熒光或較弱，且有HACAT細(xì)胞大量死亡現(xiàn)象。結(jié)論野生型GJB6轉(zhuǎn)染HACAT細(xì)胞后蛋白能夠定位于細(xì)胞膜，3種突變體中只有G11R和A88V突變體可定位于細(xì)胞膜但其編碼的CX30表達(dá)量較少，初步推測(cè)不同GJB6突變體或不能定位于角質(zhì)形成細(xì)胞膜或不能形成功能性的CX30，影響了角質(zhì)形成細(xì)胞正常的增殖和分化。

簡(jiǎn)介：中山大學(xué)博士學(xué)位論文EB病毒VCA和EBNAI重組抗原的表達(dá)及其在鼻咽癌診斷中的應(yīng)用EXORES“OFRECOMBINANTANTIG“～CAANDEBNALDRESSIONOLRECOMDINANTANUGENOIV乙GENESOFEPSTEINBARRVIRUSANDAPPLICATIONOFTHEPRODUCTSINASCREENINGTESTFORPATIENTSWITHNASOPHARYNGEAL●CARCINOMA專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)博士研究生胡波導(dǎo)師朱振宇教授答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)成員本課題獲廣東省科技攻關(guān)項(xiàng)目2007年4月廣州夕夕資助中山大學(xué)博士論文中文摘要有的片段特異性較高，但靈敏度不夠，導(dǎo)致漏檢。因此，正確認(rèn)識(shí)各片段在NPC中的診斷價(jià)值，去除特異性差的片段以避免假陽(yáng)性，合理組合特異性高的片段，通過(guò)檢測(cè)不同的NPC特異性抗體，利用檢測(cè)信號(hào)的疊加使靈敏度得以提高，是制備高質(zhì)量NPC血清學(xué)診斷試劑的關(guān)鍵。2、由于EBV抗體檢測(cè)試劑的質(zhì)量不如人意，所有該類檢測(cè)試劑均未能取得國(guó)家藥監(jiān)部門(mén)的批準(zhǔn)生產(chǎn)文號(hào)，無(wú)法實(shí)現(xiàn)檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化和檢測(cè)結(jié)果的評(píng)價(jià)。檢測(cè)質(zhì)量管理長(zhǎng)期以來(lái)處于空白狀態(tài)，嚴(yán)重影響到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。為克服以往NPC試劑檢測(cè)抗原的缺點(diǎn)，在靈敏度和特異性兩個(gè)指標(biāo)上達(dá)到理想的檢測(cè)效果，我們選擇VCA蛋白復(fù)合物中的GPL25和P18的編碼基因BALF4和BFRF3以及EBNAI基因作為目的基因，采用大腸桿菌和畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)分別構(gòu)建表達(dá)VCABALF4、EBNALAA390641和VCABFRF3的工程菌株，以期獲得具有免疫反應(yīng)性的重組抗原，同時(shí)使用表達(dá)的重組抗原作為包被抗原制備ELISA試劑檢鋇INPC病人VCA／IGA和EBNAI／IGA抗體，并比較單獨(dú)和聯(lián)合使用重組抗原檢測(cè)NPC病人VCA／IGA和NAL／IGA抗體的靈敏度和特異性，如靈敏度和特異性仍無(wú)法滿足要求，我們將在此基礎(chǔ)上，嘗試根據(jù)抗原表位預(yù)測(cè)和多肽合成的方法對(duì)EBV抗原表位進(jìn)行篩選并選用含有主要抗原決定簇的抗原片段研制EBV抗體檢測(cè)試劑以期能改善檢測(cè)抗原質(zhì)量，提高NPC血清學(xué)檢測(cè)的靈敏度和特異性，并探討重組抗原在NPC免疫檢測(cè)中的應(yīng)用。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下第一部分EB病毒VCA和EBNAI基因片段在大腸桿菌中的表達(dá)、純化及初步應(yīng)用以EBVDNA為模版，通過(guò)PCR獲得目的基因片段BALF4S1008BP，BFRF3531BP和EBNAL759BP，與原核表達(dá)載體PGEX一5X一1連接，成功構(gòu)建PGEX5XBALF4S、PGEX一5XBFRF3和PGEX一5XEBNAL的工程菌株，在大腸桿菌BL21DE3中表達(dá)GST／BALF4S、GST／BFRF3和GST／EBNAL重組融合蛋白，重組蛋白的分子量分別為63KDA、44KDA、54KDA。產(chǎn)物經(jīng)SDSPAGE、免疫印II