簡介：在美在美孔子學(xué)院與歌德學(xué)院孔子學(xué)院與歌德學(xué)院社會認(rèn)知差異社會認(rèn)知差異研究研究學(xué)位類型學(xué)術(shù)型學(xué)位類型學(xué)術(shù)型論文作者劉芃論文作者劉芃學(xué)號號2014137158720141371587培養(yǎng)學(xué)院國際關(guān)系學(xué)院培養(yǎng)學(xué)院國際關(guān)系學(xué)院專業(yè)名稱國際關(guān)系專業(yè)名稱國際關(guān)系指導(dǎo)教師喬旋指導(dǎo)教師喬旋副教授副教授20162016年5月學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的內(nèi)容外，本論文不含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文所涉及的研究工作做出重要貢獻(xiàn)的個人和集作品成果。對本文所涉及的研究工作做出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。律責(zé)任由本人承擔(dān)。特此聲明特此聲明學(xué)位論文作者簽名學(xué)位論文作者簽名年月日

簡介：分類號號密級密級單位代碼單位代碼10092學(xué)號學(xué)號20111075急性腦梗死患者非快速眼動期睡眠障急性腦梗死患者非快速眼動期睡眠障礙對認(rèn)知功能的影響礙對認(rèn)知功能的影響單位位河北北方學(xué)院河北北方學(xué)院藥學(xué)系藥學(xué)系專業(yè)業(yè)藥理學(xué)藥理學(xué)研究生姓名研究生姓名郭秀敏郭秀敏導(dǎo)師姓名及職稱導(dǎo)師姓名及職稱崔萬森崔萬森教授、教授、安芳教授安芳教授研究起止日期研究起止日期2013420143提交日期提交日期20143學(xué)位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師（或指導(dǎo)小組）的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲的研究成果，其知識產(chǎn)權(quán)歸河北北方學(xué)院所有。河北北方學(xué)院有權(quán)對本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名單位為河北北方學(xué)院，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河北北方學(xué)院所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。導(dǎo)師簽名研究生簽名2014年6月30日河北北方學(xué)院研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫，文責(zé)自負(fù)。導(dǎo)師簽名研究生簽名2014年6月30日

簡介：第一部分人蛋白激酶CΒ2基因開放讀碼框的克隆及序列分析目的克隆人蛋白激酶CΒ2基因PRKCBL的開放讀碼框F，為其進(jìn)一步的功能研究提供基礎(chǔ)。方法采用逆轉(zhuǎn)錄巢式PCR法，從人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株中擴(kuò)增出含PRKCBL基因F全長的片段，所得片段經(jīng)加“A”處理并插入T載體。經(jīng)藍(lán)白篩選，用特異引物擴(kuò)增陽性重組子，得到編碼人蛋白激酶CΒ2PKCΒ2基因的F，并與T載體相連，測序鑒定。結(jié)果通過巢式RTPCR及TA克隆獲取了PRKCB1基因的F，測序結(jié)果與GENBANK報道序列一致。結(jié)論成功克隆了PRKCB1基因的F，在技術(shù)路線上可以為某些難克隆的基因提供參考。第二部分?jǐn)y帶增強(qiáng)綠色熒光蛋白基因的人PRKCB1真核表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染目的構(gòu)建攜帶增強(qiáng)綠色熒光蛋白基因的人PRKCB1真核表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞。方法從已構(gòu)建且測序正確的PMD18TPRKCB1質(zhì)粒中，擴(kuò)增出人PRKCB1并與帶有增強(qiáng)型綠色熒光蛋白的真核表達(dá)載體PRECEIVERM29酶切后連接、轉(zhuǎn)化，所獲重組體酶切鑒定及測序。按優(yōu)化的轉(zhuǎn)染參數(shù)，將PRECEIVERM29PRKCB1轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，熒光顯微鏡觀察熒光蛋白表達(dá)，隨機(jī)視野下計算轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果構(gòu)建的PRECEIVERM29PRKCB1質(zhì)粒測序與GENBANK公布的序列一致。轉(zhuǎn)染后48小時，熒光蛋白表達(dá)最佳，轉(zhuǎn)染率為1862％。結(jié)論成功構(gòu)建了PRECEIVERM29PRKCB1真核表達(dá)質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，觀察到綠色熒光蛋白表達(dá)，為篩選穩(wěn)定表達(dá)人蛋白激酶CΒ2的內(nèi)皮細(xì)胞株，及其蛋白復(fù)合體分離提供分子工具。第三部分應(yīng)用CREIOXP系統(tǒng)構(gòu)建人蛋白激酶CΒ2重組腺病毒載體及鑒定目的構(gòu)建人蛋白激酶CΒ2重組腺病毒載體，為蛋白組學(xué)研究提供分子工具。方法從PMD18TPRKCB1質(zhì)粒中，擴(kuò)增出人PRKCB1。所得片段定向克隆至穿梭質(zhì)粒PDC315上，然后與骨架質(zhì)粒PBHG10X△E1，3CRE共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞，經(jīng)同源重組構(gòu)建腺病毒ADPRKCB1，測定重組病毒的滴度，通過免疫細(xì)胞化學(xué)和RTPCR方法進(jìn)行鑒定。結(jié)果酶切及PCR表明目的基因正確插入穿梭質(zhì)粒。同源重組后，倒置顯微鏡下可見細(xì)胞病變效應(yīng)，病毒包裝成功。擴(kuò)增純化后病毒滴度為7910°IUML。RNA及蛋白質(zhì)水平鑒定顯示目的片段有效表達(dá)。結(jié)論成功構(gòu)建了含人蛋白激酶CΒ2重組腺病毒載體，為進(jìn)一步研究其功能奠定基礎(chǔ)。

簡介：福建省是日本乙型腦炎的流行區(qū)，且每年都有多例不明原因發(fā)熱的病毒性腦炎病例。所以本研究首次在福建省三明市、南平市、福州市和龍巖市四個地區(qū)系統(tǒng)地采集蚊蟲和不明原因發(fā)熱的腦炎病例標(biāo)本，進(jìn)行福建省部分地區(qū)病毒性腦炎常見病原篩查，以了解福建省部分地區(qū)蚊蟲媒介中蟲媒病毒的種類、感染率以及病毒性腦炎常見病原種類，為我國尤其是福建省病毒性腦炎暴發(fā)流行的預(yù)防控制和診斷提供科學(xué)依據(jù)。一、采集標(biāo)本于2010年7月－8月和2011年6月，在福建省三明市、南平市、福州市和龍巖市四個采集點(diǎn)使用牛帳誘蚊法采集到中華按蚊、三帶喙庫蚊和騷擾阿蚊共3屬3種8927只（179批），以三帶喙庫蚊和中華按蚊為當(dāng)?shù)貎?yōu)勢蚊種；于2010年1月12月依靠當(dāng)?shù)叵嚓P(guān)部門在南平市、福州市和龍巖市三個采集點(diǎn)共采集到來自383例不明原因發(fā)熱和腦炎病例的304份急性期血清標(biāo)本、15份恢復(fù)期血清標(biāo)本和79份腦脊液標(biāo)本。二、對蚊蟲標(biāo)本進(jìn)行實(shí)驗室篩查用組織震蕩器將蚊蟲標(biāo)本研磨處理后，使用TRIZOLLSREAGENT從蚊蟲研磨液中提取總RNA，使用隨機(jī)引物和READYTOGOTMYOUPRIMEFIRSTSTRBEADS試劑盒制備CDNA。采用PCR技術(shù)篩查到乙型腦炎病毒PRM片段核酸陽性5份，經(jīng)序列分析發(fā)現(xiàn)5份乙型腦炎病毒均為基因1型。同時將蚊蟲研磨液接種BHK21細(xì)胞和C636細(xì)胞進(jìn)行病毒分離，沒有分離到活病毒。三、全長基因組擴(kuò)增與序列分析用基因1型乙腦病毒全基因組引物對5份乙腦病毒核酸陽性標(biāo)本CDNA進(jìn)行擴(kuò)增，從福建省南平市建陽縣采集的三帶喙庫蚊陽性標(biāo)本CDNA中擴(kuò)增出基因組全序列，命名為FJJY1073。PCR產(chǎn)物直接測序后，應(yīng)用ATGC、CLUSTALX（183）、MEGALIGN、GENEDOC32和MEGA4等生物學(xué)軟件完成全基因組序列拼接、比對和核苷酸與氨基酸同源性分析、系統(tǒng)進(jìn)化分析。結(jié)果表明福建省新檢測到的基因1型乙腦病毒FJJY1073株具有典型的基因1型乙腦病毒特征，基因組全長為10965個核苷酸，與浙江省、上海市、臺灣、山東省和遼寧省分離的基因1型乙腦病毒進(jìn)化關(guān)系最近，具有一定地域性；與減毒活疫苗株（SA14142）的核苷酸和氨基酸同源性分別為886％和975，現(xiàn)用疫苗能夠起到保護(hù)作用。四、進(jìn)行蚊蟲感染率計算采用最大似然法（MLE）計算蚊蟲中乙腦病毒的最小感染率（MIR）。結(jié)果顯示三明市沙縣中華按蚊的最小感染率最高為1251000；南平市建陽縣三帶喙庫蚊的最小感染率最高為1761000；福州市連江縣中華按蚊的最小感染率最高為0651000。五、對病例標(biāo)本進(jìn)行常見病原篩查對383例不明原因發(fā)熱和腦炎病例的急性期血清和腦脊液標(biāo)本，依次進(jìn)行5種病毒性腦炎常見病原（乙型腦炎病毒、?？刹《?、柯薩奇病毒、單純皰疹病毒和腮腺炎病毒）的特異性IGM抗體與核酸篩查。篩查出抗體陽性73例，陽性率為1906，均為單份血清標(biāo)本病例。其中，包括?？刹《竞突蚩滤_奇病毒抗體陽性47例，腮腺炎病毒抗體陽性11例，乙型腦炎病毒抗體陽性9例，單純皰疹病毒抗體陽性6例。對抗體檢測陽性的73份血清標(biāo)本與乙型腦炎病毒抗體檢測全部陰性的79份腦脊液標(biāo)本用試劑盒進(jìn)行RNA與DNA同時提取后，運(yùn)用PCR技術(shù)進(jìn)行以上5種常見病毒核酸篩查，從腦脊液中篩查出腸道病毒核酸陽性7例和單純皰疹病毒核酸陽性1例，未篩查到乙型腦炎病毒核酸。將79份腦脊液標(biāo)本接種BHK21細(xì)胞進(jìn)行病毒分離，未分離到病毒。本研究首次系統(tǒng)地在福建省進(jìn)行病毒性腦炎常見病原的篩查研究，且首次擴(kuò)增得到FJJY1073株基因1型乙型腦炎病毒全基因組序列。此次在福建省蚊蟲中篩查到的乙腦病毒為可被疫苗株保護(hù)的典型基因1型乙腦病毒，在進(jìn)化關(guān)系上與我國東部沿海省份蚊蟲中分離的1型乙腦毒株相近，表明基因1型乙腦病毒正在取代原來的3型乙腦病毒而成為福建省優(yōu)勢基因型別。福建省部分地區(qū)病毒性腦炎常見病原的構(gòu)成為腸道病毒（?？刹《竞突蚩滤_奇病毒）、腮腺炎病毒、乙型腦炎病毒、單純皰疹病毒；福建省部分地區(qū)病毒性腦炎呈以2160歲成人與15歲兒童為主要發(fā)病群體，集中在78月發(fā)病，無明顯地區(qū)分布特點(diǎn)的流行特征。

簡介：研究背景乙型肝炎病毒HEPATITISBVLRUSHBV慢性感染是一個全球性的公共衛(wèi)生問題，嚴(yán)重危害人民的身體健康。2007年AASLD指南和2005年我國“慢性乙肝防治指南”均強(qiáng)調(diào)，慢性乙型肝炎CHRONICHEPATITISBCHB治療的首要目標(biāo)是最大限度地長期持續(xù)抑制HBV復(fù)制，從而阻止疾病進(jìn)展，最終延長患者生存時間并提高生活質(zhì)量。核苷酸類似物是目前臨床上治療CHB的一組重要抗病毒藥物，各種核苷酸類似物的不斷問世，使抗HBV治療得到很大的改善，但隨著用藥時間的延長，易發(fā)生時間依賴性耐藥，耐藥是此類藥物面臨的共同問題。耐藥可能影響后續(xù)抗病毒治療的療效，使療效不佳或耐藥率增高，還可能導(dǎo)致病毒耐藥株的傳播，因此，如何降低耐藥已經(jīng)成為近年來治療CHB的研究熱點(diǎn)。病毒出現(xiàn)耐藥的順序是基因型耐藥、病毒學(xué)反彈和生化學(xué)反彈，以往對耐藥的研究多是關(guān)于耐藥后的治療決策。關(guān)于避免初治患者產(chǎn)生耐藥的系統(tǒng)研究較少。本研究以初治CHB患者為研究對象，試圖通過在一種核苷酸類似物發(fā)生基因型耐藥之前，換用另一種核苷酸類似物，避免長期使用一種核苷酸類似物產(chǎn)生耐藥。在合適的時間給予合理的藥物，最大可能地發(fā)揮現(xiàn)有較廉價藥物的療效，降低耐藥率，為臨床降低抗HBV治療耐藥提供較具體的治療方案。使患者獲得最佳的費(fèi)用效益比，以此提高患者的依從性，增加他們治療的信心，達(dá)到較長時間用核苷酸類似物抗HBV治療的目標(biāo)。本研究分三部分1拉米夫定阿德福韋酯抗HBV交替治療方案研究；2交替治療方案抗HBV治療效果觀察；3交替和單一治療耐藥者接受ETV治療前后病毒變異的克隆分析。第一部分拉米夫定阿德福韋酯抗HBV交替治療方案研究。目的；確定拉米夫定LVD和阿德福韋酯ADV各自交替治療時間及兩者的重疊時間。方法本研究分兩個試驗完成試驗一、交替治療方案中LVD用藥時間的確定35例CHB患者入選，接受LVD治療，100MGD，療程52周。分別在治療前、第12周、第20周、第24周、第36周和第52周檢測HBVDNA、ALT、HBVM和YMDD變異。試驗二、交替治療方案中ADV重疊LVD用藥時間及單獨(dú)用藥時間的確定符合入選條件的患者首先進(jìn)行YMDD檢測，YMDD陰性CHB患者進(jìn)入試驗研究，共有40例患者入選。按11隨機(jī)分為重疊組和非重疊組。重疊組先用LVD12周，100MGD，再重疊ADV4周，10MGD，最后單用ADV治療至52周；非重疊組先用LVD12周，100MGD，然后單用ADV10MGD，治療至52周。在治療前、第12周、第16周、第20周和第52周檢測血清HBVDNA水平、ALT水平和HBVM。結(jié)果最早出現(xiàn)YMDD變異的時間為20周；在治療52周后，HBVDNA轉(zhuǎn)陰率為743％2635，ALT復(fù)常率為714％2535，HBEAG轉(zhuǎn)化率為429％1535。治療52周時，兩組患者的ALT復(fù)常率、HBVDNA轉(zhuǎn)陰率和HBEAG血清轉(zhuǎn)化率之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異P005，但非重疊組在治療16周時有2例出現(xiàn)病毒反彈和轉(zhuǎn)氨酶升高。結(jié)論單用LVD12周后，LVDADV重疊4周，然后單用ADV4周。如此循環(huán)是較為理想的交替治療方案。第二部分交替治療方案抗HBV治療效果觀察。目的觀察拉米夫定LVD阿德福韋酯ADV交替用藥的治療效果和對耐藥變異的影響。方法100例YMDD陰性CHB患者入選。按11隨機(jī)分為觀察組和對照組。觀察組先用LVD12周，100MGD，再重疊ADV4周，10MGD，然后單用ADV4周，如此循環(huán)至52周；對照組接受LVD，100MGD，療程52周。在治療前、第12周、第24周、第36周和第52周時檢測血清HBVDNA水平、ALT、HBVM和耐藥變異。療程結(jié)束后進(jìn)入后續(xù)隨訪。結(jié)果治療52周后，觀察組的HBVDNA轉(zhuǎn)陰率、ALT復(fù)常率、HBEAG轉(zhuǎn)化率分別為90％、86％和459％，對照組的分別為80％、72％和429％，兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義P005，但觀察組的耐藥變異率顯著低于對照組P00455。觀察組2例患者均為RTM204V單一位點(diǎn)變異；而對照組8例患者均為多位點(diǎn)變異RTM204VRTL180M或RTM204IRTL180M。結(jié)論交替治療和單獨(dú)LVD長期治療效果相近，但可顯著降低耐藥率。即使發(fā)生耐藥，患者體內(nèi)的耐藥株為單位點(diǎn)突變。第三部分交替和單一治療耐藥者接受ETV治療前后病毒變異的克隆分析目的追蹤交替和單一治療發(fā)生基因型耐藥后接受ETV治療的患者，進(jìn)一步觀察他們接受ETV治療的效果和耐藥情況。方法交替治療中2例患者和單一治療中8例患者接受ETV治療，每位患者治療到24周時檢測血清HBVDNA水平、ALT水平、HBVM和耐藥變異，同時用克隆分析法了解ETV治療前后患者體內(nèi)病毒株的構(gòu)成比。24周結(jié)束后進(jìn)入后續(xù)隨訪。結(jié)果交替治療中2例患者治療24周時發(fā)生完全應(yīng)答HBEAG陽性慢性乙型肝炎患者，治療后ALT恢復(fù)正常，HBVDNA檢測不出和HBEAG血清轉(zhuǎn)化；HBEAG陰性慢性乙型肝炎患者，治療后ALT恢復(fù)正常和HBVDNA檢測不出；單一治療中有5例發(fā)生完全應(yīng)答，還有3例發(fā)生基因型耐藥，耐藥株為多位點(diǎn)突變，體內(nèi)變異病毒株的構(gòu)成比也較復(fù)雜。結(jié)論交替治療后發(fā)生基因型耐藥的患者接受ETV治療比單一治療組的療效好，交替治療對后續(xù)抗病毒治療藥物選擇影響較小。

簡介：碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼L0023學(xué)號S2012015004重組人P66SHC腺病毒和賴氨藤黃酸鹽對腫瘤細(xì)胞的抑制作用及機(jī)制所院姓名指導(dǎo)教師導(dǎo)師小組學(xué)科專業(yè)研究方向完成日期生物醫(yī)學(xué)工程研究所楊曉姍孫洪范研究員孫洪范楊菁俞玫生物醫(yī)學(xué)工程生物醫(yī)學(xué)工程2015年5月北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院碩士畢業(yè)論文目錄縮略詞表。1中文摘要2英文摘要4第一章前言7P66SHC的結(jié)構(gòu)及功能7P66SHC的分布及定位8P66SHC與氧化應(yīng)激8P66SHC與細(xì)胞凋亡9P66SHC與P53的相互作用11第二章重組人P66SHC腺病毒對HELA細(xì)胞和MCF7細(xì)胞增殖的抑制作用15前言15材料與方法16結(jié)果28討論41結(jié)論44參考文獻(xiàn)44第三章賴氨藤黃酸鹽體外抗腫瘤活性及分子機(jī)制研究49前言49材料與方法50結(jié)果5L討論60結(jié)論62參考文獻(xiàn)一62第四章全文總結(jié)67文章發(fā)表情況68致謝69

簡介：分類號R77221密級公開UDC610編號201220090402009級攻讀碩士學(xué)位研究生畢業(yè)論文益氣解毒方抗單純皰疹病毒性角膜炎益氣解毒方抗單純皰疹病毒性角膜炎復(fù)發(fā)的臨床研究復(fù)發(fā)的臨床研究THECLINICALRESEARCHOFYIQIDETOXIFICATIONDECOCTIONRESISTINGRECURRENCEOFHERPESSIMPLEXKERATITIS論文起止時間20101020123指導(dǎo)教師亢澤峰教授李凌教授學(xué)生姓名何玉清論文類型應(yīng)用研究學(xué)科專業(yè)名稱中西醫(yī)結(jié)合臨床研究方向眼科基礎(chǔ)與臨床學(xué)院系、部醫(yī)學(xué)院青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院2009級攻讀碩士學(xué)位研究生畢業(yè)論文1英文縮略詞索引縮略詞縮略詞英文全名英文全名中文全名中文全名RHSKRECURRENTHERPESSIMPLEXKERATITIS復(fù)發(fā)性單皰性角膜炎INFINTERFERON干擾素HSVHERPESSIMPLEXVIRUS單純皰疹病毒DTHDELAYEDHYPERSENSITIVITY遲發(fā)型超敏反應(yīng)LATSLATENCYASSOCIATEDTRAN潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄體GCGLYCOPROTEINC糖蛋白CGKGLYCOPROTEINK糖蛋白KVEGFVULARENDOTHELIALGROWHFACT血管內(nèi)皮生長因子ACVACYCLOVIR無環(huán)鳥苷

簡介：第一軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文抗人乳頭瘤病毒16型E6核酶對宮頸癌細(xì)胞株端粒酶活性和放化療敏感性的影響姓名饒智國申請學(xué)位級別博士專業(yè)腫瘤內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師張積仁2002515第一軍醫(yī)太學(xué)博士學(xué)位論文英文縮寫、英中對照一覽表二英文縮寫英文全名中文名PIPROPIDIUMIODIDE碘化丙啶RNASEARIBONUCLEASEA核糖核酸酶ARPMROUNDPERMINUTE轉(zhuǎn)／分RT．PCRREVERSETRANSCRIPTPOLYMERASE逆轉(zhuǎn)錄PCRCHAINREACTIONRZRIBOZYME核酶SDSSODIUMDODECYLSULFATE十二烷基硫酸鈉SPSSSTATISTICALPACKAGEFORSOCIALSCIENCE社會科學(xué)統(tǒng)計軟件包TBETRISBORACICACIDELETROPHORESISBUFFER三羥甲基氨基甲烷硼酸電流緩沖液TEMEDN，N,N’，N’．四甲基乙二胺N，N，N’，N四甲基乙二胺TRISTRISHYDROXYMETHYLAMINOMETLUME羥甲基氨基甲烷CASKIHPVL6陽性的人宮頸癌細(xì)胞株

簡介：狂犬病是一種急性的人獸共患中樞神經(jīng)系統(tǒng)傳染病，主要表現(xiàn)為外周神經(jīng)炎癥和急性腦炎。該病是由狂犬病病毒RABIESVIRUS，RV感染引起，且一旦發(fā)病尚無有效治療措施，死亡率幾乎為100％。據(jù)世界衛(wèi)生組織WLDHEALTHGANIZATION，WHO統(tǒng)計，全球每年至少50萬人接受狂犬病病毒暴露后的預(yù)防，狂犬病死亡人數(shù)約55萬人。近年來，我國狂犬病疫情居高不下，成為受狂犬病危害最嚴(yán)重的國家之一。因此，研制有效防治狂犬病的藥物具有極其重要的意義。目前臨床上對于狂犬病三級暴露后的治療包括接種狂犬病疫苗和注射抗狂犬病病毒免疫球蛋白WHO，2005?？箍袢〔《久庖咔虻鞍識ABIESIMMUNOGLOBULIN，RIG包括人抗狂犬病病毒免疫球蛋白HUMANRABIESIMMUNOGLOBULIN，HRIG和馬抗狂犬病病毒免疫球蛋白EQUINERABIESIMMUNOGLOBULIN，ERIG。但HRIG價格昂貴，ERIG存在異種蛋白引起過敏反應(yīng)和潛在病毒感染的風(fēng)險，且HRIG和ERIG均不易大量制備，因此急需研制其他血清替代品。全人源單克隆抗體為狂犬病的預(yù)防和治療提供了新的解決方法，已成為國內(nèi)外生物制藥領(lǐng)域?qū)＜业墓沧R。目的應(yīng)用BACTOBAC桿狀病毒昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，構(gòu)建狂犬病病毒糖蛋白RABIESVIRUSGLYCOPROTEIN，RVG的真核表達(dá)載體RBACRVG，表達(dá)并純化重組RVG蛋白RECOMBINANTRABIESVIRUSGLYCOPROTEIN，RRVG，免疫轉(zhuǎn)人IGM基因小鼠，篩選制備全人源抗重組RVG蛋白單克隆抗體，為進(jìn)一步研制用于狂犬病防治的抗體藥物奠定基礎(chǔ)。方法⑴以GENBANK發(fā)表的狂犬病病毒CVS11株糖蛋白基因序列為依據(jù)，設(shè)計特異性引物，提取病毒RNA，反轉(zhuǎn)錄為CDNA，擴(kuò)增RVG基因，將PCR產(chǎn)物和PFASTBACGP67B同時經(jīng)雙酶切后回收連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5Α感受態(tài)細(xì)胞，篩選重組質(zhì)粒PFASTBACGP67BRVG。將陽性重組質(zhì)粒PFASTBACGP67BRVG轉(zhuǎn)化DH10BAC感受態(tài)細(xì)胞，PCR鑒定陽性后抽提重組表達(dá)質(zhì)粒RBACRVG。⑵RBACRVG轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞SF9，待細(xì)胞出現(xiàn)明顯病變后分別收集培養(yǎng)上清和細(xì)胞沉淀。細(xì)胞沉淀提取DNA，RVG特異性引物PCR擴(kuò)增分析。WESTERNBLOT檢測重組RVG的表達(dá)。HISTRAPHP親和柱純化重組RVG，SDSPAGE電泳檢測。重組RVG蛋白免疫小鼠，同時設(shè)置陰性對照組和空白對照組。間接ELISA方法檢測小鼠血清抗重組RVG蛋白IGG抗體效價。⑶以重組RVG蛋白作為抗原，采用皮下多點(diǎn)及腹腔注射法免疫轉(zhuǎn)人IGM基因小鼠，采用雜交瘤技術(shù)篩選全人源抗重組RVG蛋白雜交瘤細(xì)胞株。⑷采用雙抗體夾心ELISA實(shí)驗鑒定單抗的人源性及抗體類型，并對其特異性及與滅活狂犬病病毒CVS11株的結(jié)合能力進(jìn)行鑒定。結(jié)果①將提取狂犬病病毒CVS11株的RNA反轉(zhuǎn)錄成CDNA，用RVG特異性引物擴(kuò)增后片段大小在1500BP左右。將陽性重組質(zhì)粒PFASTBACGP67BRVG雙酶切后，含有PFASTBACGP67B4700BP和RVG1500BP兩個條帶用M13通用引物對重組表達(dá)質(zhì)粒RBACRVG進(jìn)行PCR鑒定，擴(kuò)增的片段大小為3900BP，與預(yù)期相符。②重組RBACRVG通過ROCHE試劑轉(zhuǎn)染進(jìn)昆蟲細(xì)胞SF9，WESTEMBLOT檢測顯示病毒上清液和細(xì)胞沉淀裂解物在58KDA處均有特異性條帶。從病毒感染的SF9細(xì)胞中提取總DNA，用RVG特異引物擴(kuò)增產(chǎn)物有1500BP左右，表明重組質(zhì)粒RBACRVG基因被轉(zhuǎn)染至SF9細(xì)胞。以HISTRAPHP親和層析柱純化重組RVG蛋白在58KDA處有一條特異性條帶，說明蛋白純度較高。免疫小鼠檢測小鼠血清抗體效價，其中150ΜG只次小鼠血清抗重組RVG蛋白的抗體效價為1∶25600，說明重組RVG蛋白具有較好的免疫原性。間接免疫熒光結(jié)果顯示重組RVG免疫小鼠產(chǎn)生的抗體能與狂犬病病毒FLURY株特異性結(jié)合。③重組RVG蛋白免疫轉(zhuǎn)人IGM基因小鼠，取免疫后的小鼠脾細(xì)胞與SP20細(xì)胞融合，挑選陽性雜交瘤細(xì)胞株經(jīng)過三次亞克隆后共獲得5株穩(wěn)定分泌全人源抗重組RVG蛋白單抗的雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為5D1、9A3、15D6、19E6、6H11。④雙抗體夾心ELISA結(jié)果顯示5株單抗均為人源性免疫球蛋白IGM類型的抗體。間接ELISA實(shí)驗結(jié)果表明5株單抗均能特異性結(jié)合重組RVG蛋白，3株6H11、15D6、9A3可以與滅活狂犬病病毒CVS11株特異性結(jié)合。結(jié)論⑴構(gòu)建了重組表達(dá)載體RBACRVG，成功用BACTOBAC桿狀病毒昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)并純化了重組RVG蛋白，該重組蛋白具有較好的免疫原性，為制備全人源抗狂犬病病毒糖蛋白抗體提供了有效抗原。⑵建立了5株穩(wěn)定分泌全人源抗重組RVG蛋白IGM單抗的雜交瘤細(xì)胞株，5株單抗均能特異性識別重組RVG蛋白，其中3株能與滅活狂犬病病毒CVS11株特異性結(jié)合。為一步研制用于狂犬病防治的抗體藥物奠定了基礎(chǔ)。

簡介：中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文腦梗塞后輕度認(rèn)知障礙患者的P300及注意力變化特點(diǎn)姓名趙迎娛申請學(xué)位級別碩士專業(yè)康復(fù)醫(yī)學(xué)與理療學(xué)指導(dǎo)教師苑秀華20080301中國醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的學(xué)位論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得我?；蚱渌逃龣C(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名童垃逡日期坦量壘墨雖中國醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解中國醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬中國醫(yī)科大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為中國醫(yī)科大學(xué)，且導(dǎo)師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容保密內(nèi)容除外，以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名盔墊選指導(dǎo)教師簽名延壘笙日期坦莖車圣匿

簡介：目的探討2型糖尿病DIABETESMELLITU，DM認(rèn)知功能特征及其與血漿皮質(zhì)醇，腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子BRAINDERIVEDNEUROTROPHICFACTBDNF水平的關(guān)系。方法應(yīng)用多維度神經(jīng)心理學(xué)測試評估性別、年齡及教育程度相匹配的89例2型DM患者及40例對照者的神經(jīng)認(rèn)知功能，并結(jié)合PETERSON的遺忘性輕度認(rèn)知功能障礙AMNESICMILDCOGNITIVEIMPAIRMENT，AMCI標(biāo)準(zhǔn)判定兩組中的AMCI患者；采用放射免疫分析法檢測血漿皮質(zhì)醇水平；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血漿BDNF水平。結(jié)果12型DM組連線測試BTMTB、聽覺詞語記憶測試延遲回憶和再認(rèn)DELAYEDRECALLRECOGNITIONOFAUDITYVERBALLEARNINGTEST，AVLTDRRC、符號數(shù)字轉(zhuǎn)換測試SDMT，詞語流暢性測試VFT及畫鐘測試CDT的成績均明顯差于對照組均P22型DM組血漿皮質(zhì)醇水平明顯高于對照組P005，且2型DMAMCI組與2型DM非AMCI組的血漿皮質(zhì)醇水平并無差異P32型DM組血漿BDNF水平明顯低于對照組P005，僅2型DMAMCI組血漿BDNF水平與SDMT及CFTDR測試成績呈正相關(guān)分別為R0522，P結(jié)論2型DM可能導(dǎo)致患者出現(xiàn)認(rèn)知功能損傷，易發(fā)生AMCI，并伴有血漿皮質(zhì)醇水平升高及BDNF水平的下降。2型DM患者認(rèn)知功能與血漿皮質(zhì)醇、BDNF水平可能無關(guān)，但2型DMAMCI患者認(rèn)知功能可能與血漿BDNF水平相關(guān)。

簡介：點(diǎn)擊查看更多Hyper-IL-6重組腺病毒介導(dǎo)急性肝衰竭治療的實(shí)驗研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：博士學(xué)位論文‘學(xué)校代碼10023學(xué)弓B2010003045口咽部鱗狀細(xì)胞癌人乳頭狀瘤病毒感染及P16蛋白表達(dá)的臨床意義HUMANPAPILLOMAVIRUSINFECTIONANDP16PROTEINEXPRESSIONINOROPHARYNGEALSQUAMOUSCELLCARCINOMAANDTHEIRCFINICALSIGNIFICANCE所院姓名指導(dǎo)教師導(dǎo)師小組學(xué)科專業(yè)研究方向完成日期腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所黃輝張彬教授喬友林研究員、徐震綱教授腫瘤學(xué)頭頸部腫瘤的綜合治療二零一二年五月堅塞塑塑墮堂墮塑墮堂型蘭三墮博卜JI_JI究生學(xué)F訌論文締訕咯I可一一英文縮寫英文全稱HPVOSCCPCR_SPFLIPADEIADEPCCDKIHCE6E70SDSSLRRDMR中英文縮略詞HUMANPAPILLOMAVIRUSOROPHARYNGEALSQUAMOUSCELLCARCINOMAMULTIPLEXPOLYMERASECHAINREACTIONSHORTPCRFRGMENTSLINEPROBEASSAYDNAENZYMEIMMUNOASSAYDIETHYPYROCARBONATECYCLINDEPENDENTKINASESIMMUNOHISTOCHEMISTRYEARLYGENE6EARLYGENE7OVERALLSURVIVALDISEASESPECIFICSURVIVALLOCOREGINALRECURRENCERATEDISTANTMETASTASISRATELL中文全稱人乳頭狀瘤病毒口咽部鱗狀細(xì)胞癌多聚酶鏈反應(yīng)短PCR片段線性平行雜交DNA酶免疫檢測法焦碳酸二乙酯細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶免疫組織化學(xué)法早期基因6早期基因7總體生存率疾病特異性生存率局部區(qū)域復(fù)發(fā)率遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率

簡介：目的在IMPACTTWIN蛋白純化系統(tǒng)中克隆和表達(dá)人巨細(xì)胞病毒HCMVULL23基因IEL外顯子4IELEXON4及其CDNA全長，并對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行鑒定；在細(xì)菌雙雜交系統(tǒng)中克隆和表達(dá)HCMVIELEXON2，3及IELEXON4，構(gòu)建細(xì)菌雙雜交誘餌質(zhì)粒，對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行鑒定，并進(jìn)行轉(zhuǎn)化子自身激活作用鑒定。方法①提取感染了HCMVAD的人胚肺成纖維細(xì)胞HEL的DNA和RNA，以DNA和RNA為模板，分別用PCR和RTPCR擴(kuò)增IELEXON4和IELCDNA全長，再分別克隆入原核表達(dá)載體PTWINL上INTEIN2的N端，轉(zhuǎn)化ECOLIER2566，經(jīng)PCR、限制性酶切和測序鑒定陽性重組子，在低溫和低IPTG濃度下誘導(dǎo)重組子表達(dá)可溶性重組融合蛋白RIELC／INTEIN2和RIEL／INTEIN2，用SDSPAGE和WESTERNBLOT對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。②以重組質(zhì)粒PTWINL／IEL為模板擴(kuò)增IELEXON2，3和IELEXON4，分別克隆入PBT質(zhì)粒上入CI的C端，轉(zhuǎn)化ECOLIXLLBLUEMRF’KAN，經(jīng)PCR、限制性酶切和測序鑒定陽性重組子，提取陽性重組質(zhì)粒，再轉(zhuǎn)化入細(xì)菌雙雜交系統(tǒng)報告菌株，在30℃和低IPTG濃度下誘導(dǎo)重組子表達(dá)可溶性重組融合蛋白RIEL一N／ΛC1和RIEIC／ΛC1，用SDSPAGE和WESTERNBLOT對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行鑒定，并進(jìn)一步鑒定重組子自身激活作用。結(jié)果①成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒PTWINL／IELEXON4和PTWINL／IEL，并在ECOLIER2566中分別高效表達(dá)了重組融合蛋白RIELC／INTEIN2和RIEL／INTEIN2。②細(xì)菌雙雜交誘餌質(zhì)粒PBT／IELEXON23和PBT／IELEXON4構(gòu)建成功，并在報告菌株中分別表達(dá)了重組融合蛋白RIELN／ΛC1和RIELC／ΛC1，且PBT／IELEXON2，3和PBT／IELEXON4均無自身激活作用。結(jié)論在IMPACTTWIN蛋白純化系統(tǒng)中成功克隆并表達(dá)了HCMVLELEXON4和IELCDNA全長，為制備HCMVIEL特異性抗原奠定了基礎(chǔ)；在細(xì)菌雙雜交系統(tǒng)中成功構(gòu)建了無自激活作用的誘餌質(zhì)粒PBT／IELEXON23和PBT／IELEXON4，可用于篩選文庫。

簡介：流行性乙型腦炎簡稱乙腦，是由乙腦病毒（也稱日本腦炎病毒，JAPANESEENCEPHALITISVIRUS，JEV）引起、由蚊蟲傳播的一種急性病毒性傳染病，主要侵害中樞神經(jīng)系統(tǒng)，對人類健康威脅很大。WHO估計，目前乙腦每年發(fā)病約50000例，其中約13的病例死亡，且乙腦后遺癥嚴(yán)重，存活者20％40％留有神經(jīng)麻痹和心理改變等嚴(yán)重后遺癥，給家庭和社會造成了巨大的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)。近幾年我國乙腦報告病例數(shù)每年在5000～10000例之間，病死率約5％35％，且有15％的幸存者可發(fā)生嚴(yán)重的神經(jīng)精神后遺癥。盡管目前對JEV的分子生物學(xué)、免疫學(xué)特性的研究和乙腦的臨床救治等取得了很大的進(jìn)展，疫苗的應(yīng)用也使乙腦的發(fā)病率有所下降，但是關(guān)于JEV感染的分子機(jī)制還不完全清楚。病毒受體決定了病毒的宿主范圍、組織及細(xì)胞親嗜性，并影響其致病性。一般認(rèn)為JEV囊膜糖蛋白E是該病毒的受體結(jié)合蛋白（VAP），能夠介導(dǎo)病毒與細(xì)胞的膜融合。研究發(fā)現(xiàn)E蛋白抗原決定簇分為三個區(qū)，即結(jié)構(gòu)域Ⅰ、結(jié)構(gòu)域Ⅱ和結(jié)構(gòu)域Ⅲ。其中結(jié)構(gòu)域Ⅱ被認(rèn)為具有中和與血凝活性的表位，而結(jié)構(gòu)域Ⅲ是受體的主要結(jié)合部位，能夠介導(dǎo)病毒與細(xì)胞的膜融合。本研究利用大腸埃希菌表達(dá)了JEV的E蛋白和E蛋白的結(jié)構(gòu)域Ⅲ，還構(gòu)建了以JEV的E蛋白為誘餌蛋白的酵母雙雜交系統(tǒng)，為進(jìn)一步研究JEVE蛋白的結(jié)構(gòu)與功能特別是與其受體蛋白的相互作用提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。1JEVE蛋白的原核表達(dá)及其鑒定從JEV感染乳鼠腦中提取總RNA，采用特異性引物擴(kuò)增出JEVE蛋白基因。將E基因克隆到PMD18T載體中，經(jīng)酶切鑒定和序列測定無誤后，再將該基因克隆到表達(dá)載體PET28A中，并轉(zhuǎn)化ECOLI后進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。SDSPAGE鑒定結(jié)果表明，在相對分子質(zhì)量約53KDA處有明顯的條帶，與預(yù)期的6HISE融和蛋白大小一致；表達(dá)蛋白主要以包涵體形體存在于沉淀中。薄層掃描顯示目的蛋白占菌體總蛋白的40％。采用NI2NTA親和色譜柱進(jìn)行純化，獲得了純化的JEVE蛋白。WESTERNBLOT分析結(jié)果表明，表達(dá)的JEVE蛋白較好地保持了與抗JEVMAB和多抗的結(jié)合活性。2JEVE蛋白結(jié)構(gòu)域Ⅲ的原核表達(dá)及其鑒定從JEV感染乳鼠腦中提取總RNA，采用特異性引物擴(kuò)增出JEVE蛋白結(jié)構(gòu)域Ⅲ的基因。將結(jié)構(gòu)域Ⅲ的基因克隆到PMD18T載體中，經(jīng)酶切鑒定和序列測定無誤后，再將該基因克隆到表達(dá)載體PET32A中，并轉(zhuǎn)化ECOLI后進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。SDSPAGE鑒定結(jié)果表明，在相對分子質(zhì)量約20KDA處有明顯的條帶，與預(yù)期的6HISEⅢ融和蛋白大小一致；表達(dá)蛋白約50％以包涵體形體存在于沉淀中，50％以可溶性形式存在于上清中。薄層掃描顯示目的蛋白占菌體總蛋白的40％。采用NI2NTA親和色譜柱進(jìn)行純化，獲得了純化的JEVE蛋白結(jié)構(gòu)域Ⅲ蛋白。采用抗HISMAB進(jìn)行WESTERNBLOT分析，結(jié)果表明，表達(dá)的該融合蛋白較好地保持了與抗體的結(jié)合活性。3JEVE蛋白在酵母雙雜交系統(tǒng)中的表達(dá)及其對報告基因激活作用的檢測將JEVE蛋白基因片段克隆入載體PUC19中，經(jīng)酶切鑒定和序列測定無誤后，再將該基因克隆到表達(dá)載體PGBKT7中，并轉(zhuǎn)化入酵母菌AH109，獲得了以JEVE為誘餌蛋白的酵母雙雜交系統(tǒng)。檢測該系統(tǒng)中JEVE對酵母細(xì)胞有無毒性作用及對報告基因有無激活作用。結(jié)果帶有重組表達(dá)質(zhì)粒的AH109酵母菌在HIS營養(yǎng)缺陷的SD培養(yǎng)基上不生長，表明構(gòu)建的JEVE蛋白對HIS3基因無激活作用；Β半乳糖苷酶印膜法及平板法檢測結(jié)果也表明構(gòu)建的JEVE蛋白對LACZ基因也不具有激活作用，且對AH109無毒性。結(jié)論本實(shí)驗獲得的JEVE蛋白、E蛋白的結(jié)構(gòu)域Ⅲ以及以JEV的E蛋白為誘餌蛋白的酵母雙雜交系統(tǒng)，可用于JEVE蛋白的結(jié)構(gòu)與功能以及與其受體蛋白相互作用的研究。