新的肝細胞生長因子—HPPCn的分離純化及其生物學活性的研究.pdf

1、我國是一個肝病大國，隨著科技經濟的飛速發(fā)展，人們的生活節(jié)奏加快，人們的健康也頻頻亮起紅燈，肝炎、肝硬化與肝癌的發(fā)病率越來越高，對社會危害嚴重。因而深入研究肝損傷與再生的分子生物學機制，開發(fā)治療肝病新藥,意義重大。新的肝細胞生長因子HPPCn就是在此背景下誕生的一種具有特異性的促肝癌細胞系增殪活性的單體。 本研究的主要目的是對HPPCn重組表達產物進行純化并對純化產物進行體內功能學研究。根據HPPCn的分子量、等電點等特性，采用兩

2、步陰離子交換層析法純化蛋白，考馬斯亮藍法測定蛋白濃度，HPLC和凝膠掃描分析其純度，Western blot法分析其免疫原性，MALDI-TOF測定其分子量。結果，采用兩步陰離子交換層析純化的蛋白純度達94％，純化總得率為8.5％，蛋白總量和純度均達體內外活性研究的要求。 采用MTT法和<'3>H-TdR DNA摻入法檢測純化的HPPCn對肝癌細胞系SMMC 7721的促增殖活性及其劑量關系；通過鼠肝原位灌流法分離培養(yǎng)大鼠原代

3、肝細胞，<'3>H-TdR DNA摻入法檢濺HPPCn對原代培養(yǎng)大鼠肝紐胞的促增殖作用，進一步驗證HPPCn的體外促肝細胞增殖活性。結果表明, 純化HPPCn能顯著促進SMMC7721和原代培養(yǎng)大鼠肝細胞的增殖并有一定的劑量依賴性。 體內活性研究中，首先采用經典的部分肝切除模型，檢測殘肝中 HPPCn表達量的時間動態(tài)變化，結果表明HPPCn與肝再生密切相關; 建立CCl<,4>和ConA致小鼠急性肝損傷模型以及CCl<,4>復