穿心蓮內(nèi)酯自乳化釋藥系統(tǒng)的研制及其在Caco-2細(xì)胞模型的轉(zhuǎn)運機制研究.pdf

1、穿心蓮內(nèi)酯具有抗菌消炎、抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等功能，在其實際的臨床應(yīng)用中，其抗菌消炎作用顯得最為突出。然而，由于穿心蓮內(nèi)酯存在水溶性差、口服生物利用度低等缺點，導(dǎo)致其抗菌消炎作用在臨床上的應(yīng)用局限于胃腸道細(xì)菌性感染的局部性治療，為了擴(kuò)大穿心蓮內(nèi)酯的臨床應(yīng)用范圍，有必要借助合適的藥劑學(xué)手段改善其吸收方面的不足。本實驗制備了穿心蓮內(nèi)酯自微乳化釋藥系統(tǒng)，希望通過借助該藥劑學(xué)手段解決穿心蓮內(nèi)酯的上述不足。本實驗主要的研究內(nèi)容和結(jié)果如下：

2、r>　　1、建立穿心蓮內(nèi)酯的HPLC含量測定方法，并在此基礎(chǔ)上考察了穿心蓮內(nèi)酯的油水分配系數(shù)，以及pH、溫度等因素對藥物穩(wěn)定性和溶解度的影響。實驗結(jié)果顯示，穿心蓮內(nèi)酯的表觀油水分配系數(shù)P＝3.90；穿心蓮內(nèi)酯在堿性條件下易被破壞，而酸性條件特別是在pH3~4的酸性條件下最為穩(wěn)定；調(diào)節(jié)溶媒體系的pH值對穿心蓮內(nèi)酯的溶解度影響很??；穿心蓮內(nèi)酯在60℃以上易被破壞，而50℃左右藥物的穩(wěn)定性和載藥速度均較為優(yōu)異。上述結(jié)果提示，穿心蓮內(nèi)酯的細(xì)胞膜

3、透性能較好；將自乳化體系的pH控制在酸性條件有利于延長藥物的保質(zhì)期；難以通過調(diào)控自乳化體系的pH改善穿心蓮內(nèi)酯的溶解度；穿心蓮內(nèi)酯自乳釋藥系統(tǒng)的的載藥過程應(yīng)在60℃以下進(jìn)行。
　　2、通過溶解度試驗、組分間的相容性試驗和三元相圖的繪制，實驗初步篩選出了自乳化處方的組分種類；在此基礎(chǔ)上，以微乳的粒徑大小、Zeta電位和自乳化時間為評價指標(biāo)，通過星點設(shè)計-效應(yīng)面法對上述處方的組分配比進(jìn)行了優(yōu)化，篩選出了自乳化性能較為突出的處方；在篩選

4、出的自乳化處方基礎(chǔ)上，以藥物的體外溶出度為評價指標(biāo)，并以HPMC為沉淀抑制劑，對穿心蓮內(nèi)酯自乳化處方的沉淀抑制能力進(jìn)行了進(jìn)一步的優(yōu)化；對優(yōu)化的穿心蓮內(nèi)酯自乳化處方的理化性質(zhì)和體外溶出進(jìn)行測定。
　　經(jīng)處方篩選和星點設(shè)計-效應(yīng)面法優(yōu)化得出的最佳處方為Maisine35-1:Tween20:TranscutolP＝14.29:39.68:46.03；體外溶出試驗顯示，10min左右開始有藥物的析出，而添加2％的HPMC可有效減少溶出過

5、程的藥物析出，維持藥物在自乳化體系中的過飽和溶解狀態(tài)；穿心蓮內(nèi)酯自微乳（含2%HPMC）的平均粒徑為19.96nm，自乳化時間＜20s，Zeta電位﹣9.76mv，1h累計溶出百分率為94.63%，約為市售滴丸的2.14倍。
　　3、建立Caco-2細(xì)胞體外吸收模型，研究穿心蓮內(nèi)酯自微乳在Caco-2細(xì)胞模型中的跨膜轉(zhuǎn)運機制，預(yù)測其提高藥物生物利用度的能力。首先，采用細(xì)胞形態(tài)學(xué)、跨膜電阻值、甘露醇透過率和堿性磷酸酶活性等指標(biāo)對細(xì)胞

6、模型進(jìn)行檢測。實驗結(jié)果表明，在本實驗條件培養(yǎng)21天后，Caco-2細(xì)胞模型的細(xì)胞間形成緊密連接，跨膜電阻值穩(wěn)定在600Ωcm2附近，甘露醇透過率處于0.3%·h-1·cm2以下，腸腔側(cè)堿性磷酸酶的活性顯著高于基底側(cè)酶的活性（P＜0.05）。上述結(jié)果表明，實驗所構(gòu)建的Caco-2細(xì)胞模型完整性良好，可作為小腸跨膜轉(zhuǎn)運的體外模型。
　　采用符合轉(zhuǎn)運條件的Caco-2細(xì)胞模型進(jìn)行穿心蓮內(nèi)酯的轉(zhuǎn)運研究，考察穿心蓮內(nèi)酯自乳化給藥系統(tǒng)對藥物跨

7、膜轉(zhuǎn)運的促進(jìn)作用，以及藥物濃度、溫度和p-gp抑制劑對藥物轉(zhuǎn)運的影響。結(jié)果顯示，本實驗所制備的穿心蓮內(nèi)酯自微乳化給藥系統(tǒng)的Papp(AP-BL)值較穿心蓮內(nèi)酯水溶液增加了5倍左右；濃度和溫度的改變對藥物的Papp值基本沒有影響；加入p-gp抑制劑后，穿心蓮內(nèi)酯外排率(ER)由0.93降為0.76，減少了18.3%。上述實驗結(jié)果表明，本實驗制備的穿心蓮內(nèi)酯自微乳化給藥系統(tǒng)能促進(jìn)藥物的跨膜轉(zhuǎn)運；穿心蓮內(nèi)酯在Caco-2細(xì)胞模型中的轉(zhuǎn)運機制主