紅鯽Wnt信號通路相關基因克隆和表達及應答鎘金屬脅迫的機制初探.pdf

1、IItllllllJllllllllllJIIl[1lllllLlll]lllll[1lllllllY3233584轡潮南鉀軾大學碩士學位論文紅鯽Wnt信號通路相關基因克隆和表達及應答鎘金屬脅迫的機制初探學科專業(yè)細胞生物學學位類型團科學學位。專業(yè)學位導師姓名、職稱型圭塑塾絲論文編號湖南師范大學學位評定委員會辦公室二零一七年四月摘要IIIIIIIllllIIIIIIIIIIIIIlY3233584Wnt信號轉(zhuǎn)導通路在器官的發(fā)生、癌癥以及多

2、細胞生物體軸分化過程中起著重要作用。本論文主要以紅鯽中的GSK3p和Dvl2基因作為研究對象。首先采用RACE克隆技術獲得紅鯽GSK3p和Dvl2基因的cDNA全長，再分別通過半定量RTPCR技術和蛋白免疫印記(WesternBlot)技術分析GSK3p和Dvl2基因在mRNA水平和蛋白水平上的表達。最后通過一定濃度的鎘處理，比較分析了GSrdl3與Dcatenin的表達情況。結(jié)果顯示：(1)Dvl2基因全長為3042bp，編碼754個

3、氨基酸，預測蛋白分子量約為8236064，等電點為589。Dvl2基因蛋白序列和斑馬魚的相似度是953％，與鯉魚的相似度是972％，與小鼠的相似度是688％，與非洲爪蟾的相似度是705％，與人的相似度是673％。揭示了紅鯽Dvl2基因在進化中保守性不高。(2)GSK3[3基因全長為2195bp，編碼421個氨基酸，預測蛋白分子量約為4684640，等電點為905。比較不同物種氨基酸的同源相似性，GSK313蛋白序列和斑馬魚的相似度是98

4、5％，與小鼠的相似度是942％，與非洲爪蟾的相似度是921％，與人的相似度是947％?？梢钥闯鱿嗨贫缺戎刀驾^高，表明在進化過程中紅鯽GSK3p基因中擁有較高的保守性。(3)經(jīng)過半定量RTPCR的分析發(fā)現(xiàn)Dvl2基因在紅鯽8個組織中表達最高的是精巢，表達量排列第二的是眼睛，其中大腦、肌肉、皮膚和卵巢4種組織表達相對持平且較高，肝臟和腎臟中的表達相對較低。GSK3f3基因在紅鯽8個組織中表達最高的是眼睛，其次分別是大腦和肌肉，其余四個組織中