白藜蘆醇體外抑制腸道病毒71型的作用機制研究.pdf

1、目的：體外篩選抑制腸道病毒71型（EV71）的有效中藥單體，探討白藜蘆醇抗EV71的效應與分子作用機制。
　　方法：（1）噻唑藍（MTT）比色法檢測幾種常見解熱抗炎中藥單體和對照藥物利巴韋林對橫紋肌肉瘤（RD）細胞的毒性，以及對EV71的病毒抑制率；（2）EV71感染RD細胞后，Reed-Muench法檢測不同時間點EV71組、DMSO組、EV71+白藜蘆醇組和EV71+利巴韋林組的RD細胞培養(yǎng)上清液的病毒滴度（TCID50）；（

2、3）Western blot方法檢測不同時間點 EV71感染組和 EV71+白藜蘆醇處理組的IKKα、IKKβ、IKKγ、IκBα、NF-κBp50和NF-κBp65總蛋白及其磷酸化水平，以及EV71衣殼蛋白VP1的表達水平；（4）Luminex液相芯片技術(shù)檢測EV71感染組與白藜蘆醇干預組中RD細胞分泌TNF-α、IL-2、IL-6、IFN-α、IFN-β細胞因子水平。
　　結(jié)果：（1）連翹苷、人參皂苷rh1、黃芩素、虎杖苷、白

3、藜蘆醇和利巴韋林對RD細胞的半數(shù)毒性濃度（CC50）分別為849.57μg/ml、2766.54μg/ml、140.13μg/ml、532.60μg/ml、82.0μg/ml和3577.03μg/ml；（2）利巴韋林（125μg/ml）體外對EV71的抑制率達78.27％；連翹苷和人參皂苷rh1都未表現(xiàn)出明顯的抑制EV71的作用；虎杖苷與黃芩素對 EV71的抑制作用較弱，接近無毒濃度的虎杖苷（200μg/ml）和黃芩素（31.25μg/

4、ml）對EV71的抑制率分別為18.69±1.30%和31.91±1.27%；而白藜蘆醇具有較好的抗 EV71效應，31.25μg/ml時抑制率高達73.28±6.33%，半數(shù)抑制濃度（IC50）為20.70μg/ml（病毒吸附后加藥），治療指數(shù)（TI）為3.96；（3）與EV71感染組比較，8h、12h、24h時白藜蘆醇可明顯抑制RD細胞中EV71/VP1合成（P＜0.05）；白藜蘆醇處理后可使RD細胞培養(yǎng)上清液中EV71滴度下降（P

5、＜0.05）；（4） EV71感染可激活RD細胞中NF-κB信號通路，IKKα、IKKβ、IKKγ、IκBα、NF-κBp50和NF-κBp65磷酸化水平隨感染時間延長逐漸增加，而白藜蘆醇可顯著抑制 IKKα、IKKβ、IKKγ、IκBα、NF-κBp50和NF-κBp65磷酸化水平（P＜0.05）；（5）白藜蘆醇可顯著降低EV71感染后RD細胞分泌IL-6、TNF-α和IFN-β（P＜0.05），而對IL-2和IFN-α無作用（P＞0