限食聯合多不飽和脂肪酸對大鼠潰瘍性結腸炎的影響.pdf

1、目的：
　　運用析因設計旨在觀察限食聯合多不飽和脂肪酸（Polyunsaturated fatty acids， PUFAs）對大鼠潰瘍性結腸炎的影響，并初步闡釋其對大鼠PPARγ/NF-κB信號通路的影響。
　　方法：
　　選取40只健康SD雌性大鼠，隨機分為5組：正常組、模型組、限食組（CR）、5:1PUFAs自由進食組（5:1PUFAs+AL）、5:1PUFAs限食組（5:1PUFAs+CR）。正常組、限食組和模

2、型組的大鼠提供普通飼料；5:1PUFAs限食組和5:1PUFAs自由進食組的大鼠提供5:1PUFAs配制飼料，限食大鼠的喂食量占自由進食的60％。喂養(yǎng)14周后，除正常組外，其余四組均給予5%DSS溶液自由飲用1周制備大鼠潰瘍性結腸炎模型。所有大鼠3天后處死，剝離出結腸測量其長度并稱重及計算濕重指數；觀察大體形態(tài)并進行評分；并用生化法檢測結腸組織和血清髓過氧化物酶（MPO）活性；用酶聯免疫吸附測定（ELISA）法檢測結腸組織中IL-6、I

3、L-2、IL-10和TNF-α水平；用免疫組化法來檢測結腸組織中PPARγ、NF-κB p65蛋白的表達情況；用逆轉錄反應（RT-PCR）法檢測結腸組織中NF-κB p65、PPARγmRNA水平。
　　結果：
　　1.一般狀況：與自由進食的大鼠相比，限食的大鼠體重增長速度緩慢，尤其是5:1PUFAs限食組體重最輕，差別有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　2.肉眼大體形態(tài)評分：模型組可見粘膜充血腫脹，結腸表面有糜爛、出

4、血點及潰瘍，其大體形態(tài)評分明顯增加，5:1PUFAs限食組上述特征明顯緩解，大體評分降低（P<0.05）。
　　3.疾病活動指數(DAI)評分：與正常組比較，模型組DAI評分較高，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與模型組相比，5:1PUFAs限食組評分降低，差別有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　4.結腸長度、重量及濕重指數：與正常組相比，模型組結腸長度明顯縮短，結腸重量顯著升高(P<0.05)。與模型組相比，5:1PUF

5、As限食組結腸長度增長，而結腸重量及濕重指數下降(P<0.05)。
　　5.結腸組織病理學評分：結果顯示正常組結腸黏膜上皮完好，上皮細胞排列整齊，腺體規(guī)則，無炎性細胞浸潤，且無充血、水腫和潰瘍的形成；模型組結腸黏膜上皮脫落，腺體排列錯亂，彌漫性炎性細胞浸潤；與模型組相比，5:1PUFAs限食組炎癥有所改善，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。限食與5:1PUFAs的聯合作用對結腸組織病理學評分無交互作用(P>0.05)。
　　

6、6.血清和組織MPO活性：模型組血清和結腸組織中MPO活性最高，而5:1PUFAs限食組血清和結腸中MPO活性下降，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。限食與5:1PUFAs的聯合作用對血清和組織MPO活性無交互作用(P>0.05)。
　　7.細胞因子的檢測：相對于正常組，模型組大鼠結腸組織的TNF-α、IL-6水平升高，IL-2、IL-10水平降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與模型組相比，5:1PUFAs限食組IL-6、T

7、NF-α水平降低，IL-2、IL-10水平升高(P<0.05)。限食與5:1PUFAs的聯合作用對細胞因子有交互作用(P<0.05)。
　　8.免疫組化的結果：與正常組相比，模型組大鼠結腸組織PPARγ表達降低，NF-κB p65蛋白的表達水平升高，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與模型組相比，5:1PUFAs限食組大鼠結腸組織PPARγ表達升高，NF-κB p65蛋白的表達水平降低，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。限食與5:

8、1PUFAs的聯合作用對結腸組織蛋白表達NF-κB p65和PPARγ存在交互作用(P<0.05)。
　　9.RT-PCR反應的結果：與正常組相比，模型組大鼠結腸組織NF-κB p65 mRNA的表達水平升高，PPARγmRNA表達降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與模型組相比，5:1PUFAs限食組大鼠結腸組織NF-κB p65 mRNA表達水平降低，PPARγmRNA顯著增加，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。限食與5:

9、1PUFAs的聯合作用對結腸組織PPARγ和NF-κB p65 mRNA表達存在交互作用(P<0.05)。
　　結論：
　　1.葡聚糖硫酸鈉(DSS)是一種人工合成的類肝素硫酸多糖，用5%DSS溶液代替自來水飲用1周成功建立大鼠潰瘍性結腸炎模型。
　　2.限食聯合5:1PUFAs對UC大鼠有保護作用，可能的作用機理是與抗氧化損傷和減輕炎癥作用有關，上調PPARγ的表達而負性調節(jié)NF-κB的轉導，抑制炎癥細胞募集，從而減