嗜熱黃原膠降解菌的誘變育種及產(chǎn)酶條件優(yōu)化.pdf

1、黃原膠又稱漢生膠，它是一種水溶性多糖。黃原膠由于其良好的水溶性、獨特的流變性及對酸堿的穩(wěn)定性而被作為石油開采中重要的工作液增稠劑，然而它不易降解的特性給原油的后續(xù)處理帶來了難度，因此有效的降解黃原膠是石油開采過程中的關(guān)鍵工序。高溫油田一般采用化學(xué)方法破膠，這種方法不僅效率低而且會造成環(huán)境污染，給地質(zhì)帶來嚴(yán)重的破壞。生物酶解法具有安全、有效且對環(huán)境無污染等特點，近年來備受關(guān)注。本實驗旨在對前期鑒定的一株嗜熱黃原膠降解菌HT-1進行硫酸二乙

2、酯-紫外復(fù)合誘變以提高其降解黃原膠的能力，并進行優(yōu)良突變株產(chǎn)酶條件的優(yōu)化，為石油工業(yè)中能降解黃原膠，降低原油粘度，提高開采效率提供適用的工程菌。
　　對黃原膠降解菌HT-1進行硫酸二乙酯誘變，發(fā)現(xiàn)最佳誘變時間為30min，篩選得到兩株遺傳穩(wěn)定性良好的突變株，命名為DE-2和DE-14，測定其降粘率分別為36.3％和35.3％，與出發(fā)菌HT-1相比降粘率分別提高了15.0％和14.3％。再繼續(xù)對這兩株優(yōu)良菌株進行紫外誘變，發(fā)現(xiàn)最佳誘

3、變時間為240s，經(jīng)過篩選得到一株突變株DE-2.3，它的降粘率為44.1％，相比出發(fā)菌HT-1其降粘率提高了22.6％。
　　以菌株DE-2.3為研究對象，通過單因素實驗和響應(yīng)面實驗對其產(chǎn)酶培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進行優(yōu)化，得到最佳產(chǎn)酶培養(yǎng)基為(1L):3g黃原膠，3g磷酸氫二銨，0.25g氯化鈣，0.25g磷酸氫二鉀，0.4g氯化鈉，0.125g硫酸鎂，0.35g硝酸鉀;最優(yōu)發(fā)酵產(chǎn)酶條件為溫度50℃、轉(zhuǎn)速120r/min、初始pH7.