TO901317通過LXRα-NF-κB p65-cyclinD1途徑抑制人乳腺癌MCF-7細胞增殖.pdf

1、目的:
　　探討肝X受體的人工合成激動劑 TO901317抑制乳腺癌細胞增殖的分子機制，旨在為今后乳腺癌的分子靶向治療提供新的思路。
　　方法
　　1.不同濃度的TO901317處理MCF-7細胞不同時間后采用MTT法檢測對MCF-7細胞增殖的作用，流式細胞術(shù)檢測對細胞周期的影響；western blot檢測LXRα、NF-κB p65及cyclinD1等在MCF-7細胞中的蛋白表達。
　　2.運用RNA干擾技術(shù)

2、沉降MCF-7細胞中LXRα的表達，MTT法檢測TO901317對LXRαsiRNA轉(zhuǎn)染的MCF-7細胞增殖的作用，western blot檢測細胞中LXRα、NF-κB p65和cyclinD1蛋白表達的改變，間接免疫熒光法定位檢測細胞中LXRα和NF-κB p65的蛋白表達。
　　3.應(yīng)用NF-κB抑制劑PDTC，采用MTT法檢測TO901317對PDTC應(yīng)用后的MCF-7細胞增殖的作用，western blot檢測細胞中LX

3、Rα、NF-κB p65和cyclinD1等蛋白表達的改變。
　　結(jié)果:
　　1.隨著TO901317處理濃度的增加或處理時間的延長，TO901317對MCF-7細胞增殖的抑制作用逐漸增強，且能抑制MCF-7細胞進入S期，阻滯細胞于G1期。與此同時，MCF-7細胞中LXRα與LXRβ的蛋白表達均明顯增強，NF-κB p65的蛋白表達則明顯降低，IκBα蛋白表達的變化與NF-κB p65蛋白的趨勢互補，檢測到IκBα蛋白表達的

4、逐漸增強，可進一步驗證NF-κB p65表達被抑制的效應(yīng)。此外，TO901317還可明顯下調(diào)cyclinD1的蛋白表達。
　　2. LXRαsiRNA轉(zhuǎn)染的MCF-7細胞中LXRα的mRNA和蛋白表達均明顯下調(diào)。LXRαsiRNA可明顯延緩TO901317對MCF-7細胞增殖的抑制作用以及細胞中LXRα表達的上調(diào)及NF-κB p65和cyclinD1表達的下調(diào)。
　　3. NF-κB抑制劑PDTC的應(yīng)用可增強TO901317