重組Nogo-66蛋白的表達、純化和Nogo-66受體拮抗肽NAP2促進神經再生的體外研究.pdf

1、暨南大學碩士學位論文暨南大學碩士學位論文題名（中英對照）：重組重組Nogo66蛋白的表達、純化和蛋白的表達、純化和Nogo66受體拮抗肽受體拮抗肽NAP2促進神經再生的體外研究促進神經再生的體外研究ExpressionpurificationofrecombinantNogo66proteinanovelNogo66receptantagonistpeptidepromotesneuriteregenerationinvitro作者姓名

2、：孫中輕指導教師姓名肖飛及學位、職稱：博士副教授副教授學科、專業(yè)名稱：藥理學藥理學學位類型：（學術學位學位類型：（學術學位專業(yè)學位）專業(yè)學位）藥理學藥理學論文提交日期：論文答辯日期：答辯委員會主席：論文評閱人：學位授予單位和日期：重組重組Nogo66蛋白的表達、純化和蛋白的表達、純化和Nogo66受體拮抗肽受體拮抗肽NAP2促進神經再生的體外研究促進神經再生的體外研究中文摘要中文摘要研究背景：研究背景：Nogo66作為髓鞘抑制蛋白Nog

3、oA的主要活性功能片段，與受體(NgR1)結合，在神經發(fā)育和再生的過程中發(fā)揮多種生物學功能。NgR1在中樞神經系統(tǒng)外傷中發(fā)揮非常重要的作用，是抑制神經再生的關鍵性受體。因此，NgR1被認為是神經再生領域的重要靶點。目的目的：本實驗通過構建SUMO融合表達系統(tǒng)，獲得重組的Nogo66蛋白。然后運用噬菌體展示技術篩選能夠與Nogo66競爭性結合其受體NgR1的小分子多肽，并驗證其生物學功能，為NgR1為靶的小分子多肽治療神經再生障礙疾病提供

4、新的依據(jù)。方法：方法：1.利用SUMO融合蛋白系統(tǒng)，采用PCR方法，構建重組質粒pET20bSUMONogo66。將重組質粒轉化到大腸桿菌中，表達融合蛋白SUMONogo66。然后用SUMO蛋白酶和組氨酸親和層析純化，得到重組蛋白Nogo66。2.利用Ph.D.7噬菌體展示肽庫，以NgR1為靶點經過四輪生物淘選得到具有高特異性的單克隆噬菌體，用ELISA檢測它們與NgR1的結合能力。以Nogo66為基準，分析比對陽性序列的相似度，疏水輪

5、廓。采用細胞免疫熒光實驗驗證候選肽與NgR1的結合能力。采用鏈霉素親和素結合實驗來驗證候選肽是否和NgR1直接結合，并測量其解離常數(shù)。用神經元突起抑制模型來研究多肽的促神經再生功能。Westernboltting來檢測NgR1下游信號的表達情況，ROCK2，pCRMP2，pMLC。結果：結果：1.1.構建并獲得目的基因SUMONogo66，將其克隆至載體質粒pET20b中，獲得重組表達的質粒pET20bSUMONogo66。在大腸桿菌中