Notch信號(hào)通路分子在hUMSCs向胰島前體細(xì)胞誘導(dǎo)過(guò)程中的表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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1、目的:探討Notch信號(hào)節(jié)點(diǎn)分子Notch1、Hes1在人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUMSCs)向胰島前體細(xì)胞分化過(guò)程中的表達(dá)及其與Ngn3的關(guān)系。
  方法:
  1.分離培養(yǎng)并鑒定hUMSCs;
  2.采用聯(lián)合分階段誘導(dǎo)法,取P5代hUMSCs向胰島前體細(xì)胞分化,倒置相差顯微鏡觀察誘導(dǎo)前后(第7天、14天、21天)細(xì)胞形態(tài)變化,免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)誘導(dǎo)后Ngn3、Pdx-1、胰高血糖素的表達(dá);
  3.電鏡觀察誘

2、導(dǎo)前后的胰島前體細(xì)胞與對(duì)照組hUMSCs的結(jié)構(gòu)差異;
  4.誘導(dǎo)后(第7天、14天、21天)分別取細(xì)胞進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)法、real-time PCR、Western-blot檢測(cè)Notch信號(hào)通路相關(guān)分子以及Ngn3的表達(dá)變化;
  5.加入γ分泌酶抑制劑(γ-secretase inhibitor)DAPT后,Western-blot檢測(cè)Notch信號(hào)通路相關(guān)分子以及Ngn3的表達(dá)變化。
  結(jié)果:成功分離培養(yǎng)hU

3、MSCs,經(jīng)誘導(dǎo)后細(xì)胞胞體呈現(xiàn)寬大形態(tài),并出現(xiàn)胰島前體細(xì)胞的集落,免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)誘導(dǎo)21天后細(xì)胞Ngn3、Pdx-1、胰高血糖素均呈陽(yáng)性表達(dá),電鏡結(jié)果顯示胞體內(nèi)有分泌顆粒;Western-blot檢測(cè)Ngn3在誘導(dǎo)過(guò)程中逐漸升高,至誘導(dǎo)14d達(dá)到峰值,21d下降;Notch1在誘導(dǎo)后7d時(shí)最高,對(duì)照組最低;Hes1的表達(dá)7d、14d與對(duì)照組無(wú)明顯差異,于21d下降;添加DAPT后,Notch信號(hào)通路節(jié)點(diǎn)分子Hes1表達(dá)量下降,同時(shí)

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