神經軸突導向分子Semaphorin 3A在人頭頸鱗癌中的表達、作用及分子機制的研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩69頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、頭頸部鱗狀細胞癌(Head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC,以下簡稱鱗癌)是最常見的頭頸部惡性腫瘤,具有較強的局部浸潤和轉移能力,惡性程度往往較高。神經軸突導向分子3A(Semaphorin3A,SEMA3A)是Semaphorin(SEMA)家族的成員。SEMA家族是一類廣泛分布于神經系統的蛋白,對神經軸突的導向、成束、分支及突觸形成具有重要的調控作用。近來,大量研究證實SEMA3亞族的成

2、員能抑制多種惡性腫瘤的生長,因此其具有重要的診療價值,且可作為一種潛在的治療靶點。目前尚未有確切的研究資料表明SEMA3A在人類腫瘤包括頭頸癌中的表達及其作用。本研究擬探討SEMA3A在頭頸癌中的表達及其功能和相關的機制。
  目的:
  1、觀察SEMA3A在人頭頸鱗癌標本中的表達,評價SEMA3A的表達水平與頭頸鱗癌臨床病理以及預后的關系;
  2、觀察SEMA3A對頭頸鱗癌移植瘤生長的影響;
  3、明確S

3、EMA3A對頭頸鱗癌細胞生物學行為的影響;
  4、初步探討SEMA3A對頭頸鱗癌作用的分子生物學機制。
  方法:
  1、應用免疫組織化學染色的方法檢測100例人頭頸鱗癌標本及20例正常頭頸粘膜組織標本中SEMA3A的表達高低;統計分析SEMA3A表達水平與腫瘤臨床病理以及預后的關系。
  2、構建HNSCC的裸鼠移植瘤動物模型,利用能夠過表達SEMA3A的腺病毒pAdCMV-SEMA3A-MCS-EGFP及

4、空載病毒pAdCMV-MCS-EGFP分次多點注射于移植瘤瘤內及瘤周,觀察SEMA3A過表達后腫瘤生長的大小變化。
  3、將pAdCMV-SEMA3A-MC S-EGFP腺病毒及pAdCMV-MCS-EGFP空載病毒感染HNSCC細胞系,獲得瞬時高表達SEMA3A的細胞株(實驗組)及相對低表達SEMA3A的細胞株(對照組);同時利用siRNA抑制HNSCC細胞中SEMA3A的表達,觀察病毒感染及siRNA抑制使SEMA3A表達改

5、變后細胞表型的變化;應用RT-qRCR、Western blot方法分別檢測兩組細胞中SEMA3A以及上皮和間充質標志物基因水平和蛋白水平的表達變化;應用RT-qRCR、Westernblot、CCK-8、克隆形成實驗、TUNEL染色等方法分析SEMA3A對HNSCC細胞及移植瘤組織的增殖、侵襲、凋亡、細胞周期等相關分子生物學作用的影響。
  4、應用RT-qRCR、Western blot等實驗方法,研究SEMA3A在HNSCC

6、細胞及組織中發(fā)揮抑癌作用的潛在機制。
  結果:
  1、免疫組織化學染色結果顯示:20例正常組織中18例檢測出SEMA3A高表達,而100例頭頸鱗狀細胞癌標本中只有43例檢測出SEMA3A高表達,表明SEMA3A在腫瘤組織中呈現低表達(p<0.001); SEMA3A的表達與頭頸鱗癌的淋巴結轉移、病理分級、臨床分期密切相關(p<0.05);生存分析表明SEMA3A高表達組患者總體生存率明顯高于低表達組患者(p<0.05)。

7、
  2、通過構建HNSCC裸鼠移植瘤模型發(fā)現,多次多點注射SEMA3A腺病毒于移植瘤瘤內及瘤周,能夠明顯抑制腫瘤的生長且誘導組織的凋亡。
  3、SEMA3A的高表達明顯抑制了HNSCC細胞的上皮-間充質轉化(EMT,epithelial-mesenchymal transition)進程,表現為細胞形態(tài)學的改變,上皮標志物E-cadherin和β-catenin表達升高,間充質標志物Vimentin和N-cadherin

8、表達下降。細胞的遷移、侵襲、增殖能力顯著降低,且細胞周期受到抑制,同時細胞凋亡現象顯著。
  4、通過腺病毒感染使SEMA3A過表達后,NF-κB通路、SNAI2明顯受抑制,Caspase-5和Caspase-7明顯被激活;而通過siRNA抑制SEMA3A后,NF-κB通路、SNAI2被激活,Caspase-5和Caspase-7隨即受抑制,提示SEMA3A可能通過NF-κB和SNAI2抑制遷移、侵襲和EMT進程,通過Caspas

9、e通路介導細胞的凋亡。
  結論:
  本實驗證實SEMA3A在人頭頸鱗狀細胞癌組織中呈低表達,與腫瘤的淋巴結轉移、病理分級、臨床分期及患者的生存率密切相關,提示SEMA3A的異常表達可能與頭頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展有關,并且可作為一種新的生物學標志物用于患者的診斷和預后的預測。其次,SEMA3A能通過降低細胞的增殖能力、促進凋亡來抑制頭頸癌腫瘤的生長,可能通過抑制NF-κB、SNAI2信號通路來抑制頭頸鱗癌細胞發(fā)生EMT,降低其遷

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論