從神經-ICC-平滑肌網絡探討補腎縮尿法對膀胱過度活動癥的作用機制.pdf

1、目的:
　　膀胱過度活動癥（Overactive Bladder，OAB）作為一種以下尿路病理和尿急癥狀為特征的病癥，其明顯對患者的日常生活和社會活動造成極大的干擾，已經成為困擾人們的一大疾病。神經-ICC-平滑肌網絡作為新近認為是OAB的其中一個致病原因，日益受到研究人員關注的研究熱點。縮泉丸的功效為補腎縮尿，固脫止遺。腎氣丸功效為溫補腎陽，振奮陽氣，縮泉丸與腎氣丸合用在治療OAB上有良好的療效。本課題以神經-ICC-平滑肌網絡

2、為切入點，研究補腎縮尿法對OAB的作用機制。
　　方法:
　　本研究以膀胱出口梗阻模型作為OAB的研究模型。將豚鼠分為正常組、模型組、陽性組、縮泉丸組、腎氣丸組和縮泉丸聯用腎氣丸組六個組。分成三部分1、補腎縮尿法對豚鼠OAB的治療作用:測各組的排尿次數、排尿量、尿動力參數和離體肌條功能參數。2、研究補腎縮尿法對OAB豚鼠膀胱神經-ICC-平滑肌網絡結構的影響:通過組織免疫熒光法觀察膀胱ICC、乙酰膽堿能神經(VAChT)、P

3、物質肽能神經的相對含量變化，以及透射電鏡觀察整體膀胱神經-ICC-平滑肌網絡結構;3、研究補腎縮尿法對OAB豚鼠膀胱神經-ICC-平滑肌網絡信號傳導的影響:通過組織免疫熒光雙標觀察ICC與M3、P2X5受體亞型的共表達情況，觀察補腎縮尿法是否作用于ICC上的M3和P2X5受體，以及采用熒光定量PCR法、westernblotting法檢測ICC-平滑肌網絡縫隙連接蛋白Cx43mRNA及蛋白的表達。
　　結果:
　　1、模型組

4、能顯著增加豚鼠排尿次數，增加膀胱漏尿點壓力(BLPP)，最大膀胱壓(MVP)及殘余尿量(PVR)的作用(P＜0.05);模型組顯著提高了膀胱肌條對激動劑的刺激敏感性，對由于KCL激動劑引起的收縮和Carbachol引起的收縮有顯著性提高(P＜0.05);模型組ICC相對表達量顯著升高，而肽能神經的相對表達量顯著降低(P＜0.05)，模型組膀胱神經-ICC-平滑肌網絡之間的連接更為緊密;ICC上神經受體M3和P2X5表達量在造模后顯著升高

5、(P＜0.05)，縫隙連接蛋白Cx43的mRNA和蛋白表達量顯著升高(P＜0.01)。
　　2、補腎縮尿法對豚鼠OAB的治療作用:用托特羅定、縮泉丸或縮泉丸聯用腎氣丸組治療能減少OAB模型豚鼠的排尿次數(P＜0.05)，托特羅定、縮泉丸、腎氣丸以及縮泉丸聯用腎氣丸組有不同程度降低BLPP、MVP及PVR的作用(P＜0.05)。托特羅定、縮泉丸以及縮泉丸聯用腎氣丸組均有不同程度顯著性降低由于KCL激動劑所引起的肌條收縮作用(P＜0.

6、05)，并在Carbachol不同濃度影響下的收縮作用均有顯著性降低(P＜0.05）。
　　3、補腎縮尿法對OAB豚鼠膀胱神經-ICC-平滑肌網絡結構的影響:免疫熒光結果顯示，給予縮泉丸、腎氣丸和縮泉丸聯用腎氣丸有不同程度降低ICC細胞和提高神經纖維P物質的相對表達量，其中縮泉丸聯用腎氣丸效果最為顯著(P＜0.05，P＜0.01)。透射電鏡圖顯示，分別給予托特羅定，縮泉丸，腎氣丸或補腎縮尿法治療后，均有不同程度改善神經-ICC-平

7、滑肌結構間的聯系，聯系減少。
　　4、補腎縮尿法對OAB豚鼠膀胱神經-ICC-平滑肌網絡信號傳導的影響:對神經受體與ICC的免疫熒光雙標結果顯示，補腎縮尿法治療后，ICC細胞上的M3神經受體表達顯著下降(P＜0.05);縮泉丸聯用腎氣丸干預后，膀胱縫隙連接蛋白Cx43mRNA和蛋白表達量呈極顯著下降(P＜0.01），證明縮泉丸聯用腎氣丸能夠通過減少沖動信號的傳遞而達到調節(jié)膀胱功能。
　　結論:
　　1、模型組能增加排尿

8、次數，伴有平滑肌不穩(wěn)定收縮，并對激動劑的敏感性伴有顯著性升高，代表造模成功。其中膀胱ICC數量升高，代表OAB的發(fā)生與ICC數量變化有關。
　　2、縮泉丸聯用腎氣丸組明顯改善OAB豚鼠排尿次數，能夠減少膀胱漏尿點壓力(BLPP)、最大膀胱壓(MVP)及殘余尿量(PVR)，改善膀胱肌條張力活動，初步證明補腎縮尿法具有改善OAB膀胱病理狀態(tài)的作用。
　　3、模型組ICC數量明顯增加，神經纖維數量明顯增加，透射電鏡結果顯示神經-I