瑞舒伐他汀對心肌梗死后大鼠TGF-β1和α-SMA表達的影響.pdf

1、背景和目的：
　　心肌梗死主要是由于冠狀動脈閉塞引起心肌細胞嚴重而持續(xù)性缺血導致心肌細胞死亡；多數(shù)是在冠狀動脈粥樣硬化的基礎上形成血栓引起。在某種誘因作用下，冠狀動脈粥樣硬化斑塊破裂、血小板在破裂的斑塊表面聚集形成血栓，堵塞管腔導致心肌缺血壞死。心肌梗死后心肌細胞、非心肌細胞、細胞外基質等基因表達發(fā)生改變使心臟的結構、代謝和功能都經(jīng)歷了一個重組改建的過程，引起心肌重塑；心肌重塑是心力衰竭發(fā)病和死亡的重要因素。目前主要通過藥物治療和

2、以溶栓、經(jīng)皮冠狀動脈成形術、冠狀動脈旁路移植術為代表的再血管化治療等手段來改善心肌缺血，但術后需要藥物維持治療來減少心肌重塑。他汀類藥物在改善心肌梗死后心肌重塑的作用在臨床研究中不斷得到肯定。
　　轉化生長因子（Transforing Growth Factor，TGF）不僅在炎癥、組織修復和胚胎發(fā)育等方面發(fā)揮作用，而且在細胞的生長、分化和免疫功能的調節(jié)方面有重要作用。其中轉化生長因子β1（Transforing Growth F

3、actor-β1，TGF-β1）刺激纖維細胞的增殖，抑制心肌細胞、上皮細胞、內皮細胞的增殖；它還能促進細胞外基質（extracellular matrix，ECM）蛋白（如膠原蛋白、纖維粘連蛋白）的表達和抑制ECM的降解。TGF-β1通過對細胞形態(tài)、增殖和分化的影響引起心肌纖維化。在器官纖維化的形成過程中，一些間質效應細胞發(fā)揮關鍵作用。國內外關于心肌間質效應細胞在纖維化作用中的研究多集中在成纖維細胞，而有關心肌α-平滑肌肌動蛋白（α-S

4、mooth Mucle Action Expression，α-SMA）與心肌纖維化的研究尚無明確的報告。國內外學者發(fā)現(xiàn)α-SMA作為心肌間質細胞，其數(shù)量多，與心肌細胞最貼近，主要通過抑制心肌 ECM降解酶、促進心肌纖維化發(fā)展，在心肌纖維化發(fā)展中起到了不可忽視的作用。
　　他汀類是羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(HMG-CoA)抑制劑，是治療動脈粥樣硬化性心血管疾?。ˋSCVD）的常用藥。除調脂作用外，還有延緩動脈粥樣硬化（athe

5、rosclerosis，AS）程度、抗炎、保護神經(jīng)和抗血栓、促進血管再生等作用。他汀類藥物改善心肌梗死后心肌重塑的機制在不斷的研究中，但未有明確的結論。為此我們建立大鼠的心肌梗死模型，通過觀察瑞舒伐他汀對大鼠心肌梗死后α-SMA、TGF-β1表達的影響，探討其改善心肌重塑的機制；為瑞舒伐他汀改善心肌梗死后心肌重塑提供新依據(jù)。
　　方法：
　　成年SD雄性大鼠45只，由鄭州大學動物實驗中心提供，體重250-350g，隨機將45

6、只大鼠分為：假手術組（Sham），心肌梗死組（MI），瑞舒伐他汀干預組，每組各15只。Sham組只穿線不結扎，另外兩組通過結扎冠狀動脈左前降支建立心肌梗死模型，術后給予青霉素每天20萬單位抗感染，共3天。干預組給予瑞舒伐他汀鈣1mg/（kg.d)溶入生理鹽水2ml中灌胃，MI及Sham組每天以2ml生理鹽水灌胃；4周后通過脫臼法處死大鼠，摘取大鼠心臟取出梗死區(qū)組織。一部分通過石蠟包埋切片觀察心肌形態(tài)改變，應用massion測量大鼠心肌膠

7、原蛋白容積分數(shù)(collagen volume fraction，CVF)，行免疫組化法（SP法）測定α-SMA、TGF-β1蛋白的表達量，另一部分液氮保存后通過 RT-PCR測定α-SMA、TGF-β1的mRNA表達水平。
　　結果：
　　1.大鼠心肌梗死模型的成功率67.8％，結扎大鼠左冠狀動脈前降支（LAD）后可見左心室局部顏色變白。四周后肉眼可見室壁明顯變薄。HE染色和Masson染色可見梗死區(qū)組織壞死，結構紊亂，炎

8、癥細胞浸潤，有大量膠原纖維組織形成，與梗死區(qū)外的正常組織區(qū)別明顯，心肌梗死（MI）模型制作成功。
　　2.免疫組化結果示：與Sham組相比，MI組和干預組的α-SMA、TGF-β1蛋白表達明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05）；與MI組相比，干預組α-SMA、TGF-β1蛋白表達明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。
　　3. RT-PCR結果示：與 Sham組相比，MI組和干預組α-SMA、TGF-β1的mRNA

9、表達明顯較多，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05）；與MI組相比，干預組α-SMA、TGF-β1的mRNA表達均明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。
　　結論：
　　1.MI模型組α-SMA、TGF-β1蛋白及mRNA表達水平明顯高于假手術組，且梗死區(qū)心肌膠原纖維蛋白含量增加，提示α-SMA、TGF-β1可能參與心肌梗死后心肌重塑。
　　2.干預組α-SMA、TGF-β1表達量明顯少于MI組，且膠原纖維生成減少，提