解脂耶氏酵母親環(huán)蛋白基因的克隆及其打靶載體的構建.pdf

1、親環(huán)蛋白(cyclophilin，CyP)家族是一類廣泛存在于原核和真核生物體內，并在結構上高度保守的多功能蛋白質。該家族屬于具有催化含脯氨酸的寡肽底物順反異構作用的肽脯氨酰順反異構酶(peptidyl-prolylcis-transisomerases，PPIase)。CyP通過催化含肽脯氨酰的順反異構而幫助蛋白質折疊和組裝。此外，CyP還起著分子伴侶的作用，在應激反應中參與調節(jié)信號轉導途徑，并影響RNA的剪接過程。自最初CyP作為免

2、疫抑制劑環(huán)孢素A(cyclosporinA，CsA)的細胞受體被發(fā)現(xiàn)以來，目前大約有130種CyP同源異構體被發(fā)現(xiàn)和克隆。CyP家族各成員間不僅分子量不同，而且在細胞分布及功能上也存在著差異。解脂耶氏酵母(Yarrowialipolytica)是研究最廣泛的非常規(guī)酵母之一。它能以含脂肪或蛋白質的物質作為碳源生產甲烷。在有氧的情況下，它能利用烷烴類化合物、油脂、葡萄糖等生產檸檬酸。因此，解脂耶氏酵母菌株很容易從奶制品或香腸中分離，也很容易

3、從油田中分離。解脂耶氏酵母對人沒有致病力。 研究表明，在解脂耶氏酵母中含有13個CyP基因，它們分布于不同染色體上，本文選取其中1個CyP基因(GenBank登錄號：YA130C15653p)為研究對象。生物信息學分析表明該cya含638個氨基酸，分子量約為71Kda，pI值為5.59，可能存在于細胞質中。該蛋白含2個功能結構域(WD40和cyclophilin)，雖然與人類CyPA相似度僅為44.8％，但決定CyP結構和功能的