單體尿酸鈉誘發(fā)的炎癥反應中線粒體 DNA的表達及其意義的研究.pdf

1、目的：痛風是一組由嘌呤代謝紊亂引起的以單鈉尿酸鹽(monomersodium urate，MSU)晶體沉積為特征的疾病。痛風的急性發(fā)作是MSU在關節(jié)及關節(jié)外組織以結晶形式沉積引起的急性炎癥反應。MUS作為誘發(fā)痛風的始動因素早已受到重視，但其導致炎癥反應的機理仍未完全明確，通過建立單鈉尿酸鹽晶體誘導的小鼠急性腹膜炎模型，大鼠急性關節(jié)炎模型，體外證實MSU誘導局部炎癥過程中相關炎癥因子IL-1β、IL-18的分泌，動態(tài)觀察痛風炎癥過程中，線

2、粒體DNA的表達與炎癥反應的相關性。為臨床探索特異性干預策略提供理論基礎。
　　方法：第一部分:將C57BL16雄性小鼠分2組;PBS對照組（腹腔注射0.2mlPBS）MSU組（腹腔注射0.2ml的15mg/ml的MSU）,分別在注射2h,4h,6h,8h,12h,16h,20h,24h后，取小鼠外周血，PBS灌洗腹腔取腹腔灌洗液，并取腹膜組織熒光免疫染色。采用ELISA檢測血漿、腹腔灌洗液中的炎癥因子IL-1β、IL-18水平，

3、提取DNA,熒光定量實時聚合酶鏈法（Real-Time PCR）測定各組血漿、腹腔灌洗液中mtDNA表達量。并取小鼠腹膜組織病灶處制石蠟切片及腹腔灌洗液涂片，切片及細胞涂片均免疫熒光染色在熒光顯微鏡下觀察分析。
　　第二部分:選用雄性SD大鼠隨機分為4組：PBS對照組，MSU組，MSU+DNASE1組及DNASE1組分別在大鼠右側踝關節(jié)腔注入PBS，MSU，MSU+ DNASE1及DNASE1。注射后0,2,4,6,8,12,16

4、,20,24h觀察大鼠步態(tài)變化，測量足趾容積及踝關節(jié)直徑，周徑。并取造模后4h，8h，16h，20h，24h大鼠血漿，踝關節(jié)腔洗脫液檢測炎癥因子IL-1β，mtDNA復制水平及病理檢查。動態(tài)觀察MSU誘導的炎癥過程中，mtDNA表達復制與炎癥的不同階段的相關性。
　　結果：第一部分，MSU急性腹膜炎小鼠的血漿、腹腔灌洗液中的炎癥因子IL-1β、IL-18水平在腹腔注射 MSU2h,4h后明顯升高，高于其他時間點及對照組（P均﹤0.

5、05）；MSU腹膜炎小鼠的血漿、腹腔灌洗液中線粒體DNA（mitochondrialDeoxyribonucleic acid，mtDNA）表達量給藥4h開始后升高，6h達峰值，8h開始下降，明顯高于其他時間點及對照組（P均﹤0.05）；對MSU腹膜炎小鼠的腹腔灌洗液涂片及腹膜組織進行熒光免疫染色發(fā)現： MSU組給藥6小時后開始出現中性粒細胞的涌入，12h后開始出現中性粒細胞的聚集并在24h形成大量中性粒細胞的聚集即中性粒細胞外核酸網的

6、形成。
　　第二部分，大鼠急性關節(jié)炎模型中MSU組及MSU+DNASE1組均在2小時開始出現關節(jié)腫脹，8小時達峰值，MSU組24小時后基本腫脹消退，功能恢復。MSU+DNASE1組緩解明顯遲于與MSU組，差異有統(tǒng)計學意義（P﹤0.05）。MSU組及MSU+DNASE1組血漿，踝關節(jié)腔洗脫液炎癥因子IL-1β變化情況相似（P均>0.05）。造模后8小時，MSU組及MSU+DNASE1組血漿中均開始出現mtDNA的復制明顯，12小時均

7、達峰值，但MSU+DNASE1組血漿mtDNA的表達低于MSU組。關節(jié)灌洗液mtDNA的復制結果為4小時至8小時，PBS對照組，DNASE1組及MSU+DNASE1組無明顯差異均低于MSU組，MSU組在12小時達峰值后呈下降趨勢，而MSU+DNASE1組由12小時始輕度升高并在后面時間段內呈現平穩(wěn)趨勢，但整體過程仍明顯底于MSU組（P均﹤0.05）。12小時病理檢查示：PBS對照組，DNASE1組無明顯炎癥表現，MSU+DNASE1組最