新生期驚厥腦損傷中驚厥急性期瘦素干預(yù)作用及機(jī)制初探.pdf

1、目的：探討驚厥急性期瘦素干預(yù)對(duì)三氟乙醚誘導(dǎo)新生期大鼠長(zhǎng)程反復(fù)驚厥遠(yuǎn)期神經(jīng)行為、學(xué)習(xí)記憶能力損傷的影響和分子機(jī)制。
　　方法：7日齡(P7)的Sprague-Dawley(SD)大鼠共40只，隨機(jī)分為四組(n=10只/組),即：?jiǎn)渭儗?duì)照組（CON組)、瘦素對(duì)照組(CON+LEP組)、單純驚厥組(RS組)及瘦素驚厥組(RS+LEP組)。CON組每日予正常喂養(yǎng)；RS組喂養(yǎng)同CON組，另連續(xù)7日，每日吸入三氟乙醚誘發(fā)驚厥發(fā)作一次，一次持續(xù)

2、30 min；RS+LEP組操作同 RS組，但在每日驚厥后一小時(shí)腹腔注射4mg/kg瘦素；CON+LEP組除不吸入三氟乙醚外，操作同RS+LEP組。于P23、P30分別進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分（平面翻正反射測(cè)試、懸崖回避反射測(cè)試、負(fù)向趨地反射測(cè)試、前肢懸吊測(cè)試）。于P23、P30分別進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)測(cè)試。于P27-P33期間行Morris水迷宮測(cè)試。于P34取腦組織標(biāo)本，用Neo-Timm’s染色法檢測(cè)海馬苔蘚纖維發(fā)芽情況，免疫蛋白印跡技術(shù)檢測(cè)大

3、腦皮層及海馬Bec lin-1、Beclin-1/Bcl-2比值、Cathepsin E、P53的表達(dá)。
　　結(jié)果：⑴神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分顯示：RS組（P23、P30）平面反正反射、懸崖回避反射、負(fù)向趨地反射時(shí)間較CON組明顯延長(zhǎng)（P﹤0.05）；RS+LEP組（P23、P30）平面反正反射、懸崖回避反射、負(fù)向趨地反射時(shí)間趨于正常，較RS組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P﹤0.05）。RS組（P23、P30）前肢懸吊時(shí)間較CON組明顯縮短（P﹤0.05

4、）；RS+LEP組（P23）前肢懸吊時(shí)間趨于正常，較RS組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P﹤0.05）。⑵曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)顯示：RS組（P23、P30）延遲時(shí)間較CON組明顯延長(zhǎng)（P<0.05）；RS+LEP組（P23、P30）延遲時(shí)間趨于正常，較RS組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；RS組（P23、P30）水平得分較CON組明顯降低（P<0.05）；RS+LEP組（P23、P30）水平得分趨于正常，較RS組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。(3)RS組（P23、P

5、30）垂直得分較CON組明顯降低（P<0.05）；RS+LEP組（P23、P30）垂直得分趨于正常較RS組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。(3)RS組（P23、P30）開場(chǎng)得分較CON組明顯降低（P<0.05）；(4)RS+LEP組（P23、P30）開場(chǎng)得分趨于正常，較RS組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。⑶Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)顯示：逃避潛伏期：從P28至P32，四組大鼠逃避潛伏期逐漸縮短，RS組（P29、P30、P31、P32）逃避潛伏

6、期較CON組明顯延長(zhǎng)（P﹤0.05）；RS+LEP組逃避潛伏期趨于正常，較RS組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P﹤0.05）；空間探索測(cè)試：RS組(P34)穿越平臺(tái)次數(shù)較CON組明顯減少（P﹤0.05）；RS+LEP組(P34)穿越平臺(tái)次數(shù)趨于正常，較RS組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P﹤0.05）。⑷Neo-Timm’s染色結(jié)果顯示：RS組CA3區(qū)及海馬齒狀回苔蘚纖維發(fā)芽程度較CON組明顯增加（P﹤0.05）；RS+LEP組CA3區(qū)及海馬齒狀回苔蘚纖維發(fā)芽程度趨于

7、正常，較RS組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P﹤0.05）。⑸Western blot結(jié)果顯示：RS組皮層組織中 Beclin-1、Beclin-1/Bcl-2、Cathepsin E、P53表達(dá)量較 CON組明顯增高（P﹤0.05）；RS+LEP組皮層組織中Beclin-1、Beclin-1/Bcl-2、Cathepsin E、P53表達(dá)量趨于正常，較RS組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P﹤0.05）；RS組海馬組織中 Beclin-1、Beclin-1/Bcl-2

8、、Cathepsin E、P53表達(dá)量較CON組明顯增高（P﹤0.05）；RS+LEP組海馬組織中Beclin-1、Beclin-1/Bcl-2、Cathepsin E表達(dá)量趨于正常，較 RS組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P﹤0.05）。
　　結(jié)論：①急性期瘦素干預(yù)，能顯著改善新生期長(zhǎng)程反復(fù)驚厥所致遠(yuǎn)期神經(jīng)行為及學(xué)習(xí)記憶能力損傷，抑制海馬齒狀回及 C A3區(qū)苔蘚纖維異常發(fā)芽，具有神經(jīng)保護(hù)作用。②急性期瘦素干預(yù)可抑制新生期驚厥所致遠(yuǎn)期海馬和大腦皮