sCTLA-4聯(lián)合sFasL誘導小鼠皮膚移植免疫耐受及CTLA-4-FasL膜鑲嵌表達載體的構(gòu)建.pdf

1、CTLA-4是表達于活化T細胞表面的共刺激信號抑制配體，與抗原遞呈過程中T細胞活化的負調(diào)控有關(guān)；FasL屬于腫瘤壞死因子家族，能傳導細胞凋亡信號，誘導活化的T細胞凋亡；白介素-10(IL-10)和轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)都是體內(nèi)具有免疫抑制功能的分子。 第一部分探討了sCTLA-4聯(lián)合sFasL、IL-10、TGF-B誘導小鼠皮膚移植免疫耐受的作用及機制。以C57BI．／6小鼠為供體，BALB／c小鼠為受體進行皮膚移植，分

2、7個組。移植完后進行肌肉注射給藥并觀察皮膚的存活狀況：用ELISA試劑盒檢測各組小鼠血清中IL-2、IL-4和FN-T的含量；取實驗鼠、相應供體鼠及實驗不相關(guān)ICR鼠的脾臟淋巴細胞，進行雙向混合淋巴細胞培養(yǎng)，以MTr法測刺激指數(shù)。實驗結(jié)果為：NS組皮膚平均存活時間為6．9d，而ITCF組皮膚平均存活時間最長，達22．5d：C組的皮膚平均存活時間為19．2d，和CsA組(15．7d)相比能差異顯著性延長皮膚存活時間；CF組的皮膚平均存活時

3、間比C和F組分別延長2．5d和5．7d；ITCF組與CF組相比存活時間無顯著異性，但與IT組相比具有差異極顯著性；各給藥組與對照組相比血清中IL-2和IFN-y含量顯著降低，IL-4含量顯著升高。以上結(jié)果可以顯示本實驗室基因工程表達的sFasL和sCTLA-4在體內(nèi)具有較強的誘導免疫耐受的生物活性：sCTLA-4、sFasL單用或兩者聯(lián)用都能延長移植皮膚的存活時間，并且聯(lián)用具有協(xié)同效應；單獨使用以sCTLA-4效果最佳，并且優(yōu)于臨床上常

4、用免疫抑制藥物CsA；在sCTLA-4、sFasL聯(lián)用的基礎(chǔ)上應用IL-10、TGF-B，疊加效應不明顯；sCTLA-4和sFasL誘導的皮膚移植免疫耐受具有抗原特異性；血清中細胞因子IL-2和IFN-γ含量與移植物存活時間呈負相關(guān)，而IL-4呈正相關(guān)；本研究工作為尋找免疫耐受誘導途徑、指導臨床用藥以及預測受體耐受狀況和移植物存活時間提供一定實驗和理論依據(jù)。 第二部分內(nèi)容是將CTLA-4和FasL的胞外區(qū)及跨膜區(qū)序列體外拼接在

5、一起并克隆到腺病毒穿梭載體pAdTrack-CMV形成pAdTrack-CMV-CF質(zhì)粒，同時構(gòu)建了另外3個質(zhì)粒：單獨含有FasL胞外區(qū)及跨膜區(qū)的質(zhì)粒pAdTrack-CMV-F；同時干擾B71、B7．2的siRNA干擾質(zhì)粒pAdTrack-CMV-U6B7si；同時表達CTLA-4和FasL及干擾B7．1、B7．2的質(zhì)粒pAdTrack-CMV-CFU687si。將以上4個質(zhì)粒分別與腺病毒骨架載體pAdeasy-1在BJ5183菌株里