不同濃度17β-雌二醇對IL-1β誘導的大鼠纖維環(huán)細胞凋亡的影響.pdf

1、目的:椎間盤退行性病變是指隨著年齡的增長，椎間盤各組織發(fā)生的老化退變。是導致許多脊柱退行性疾病的前提和基礎，如椎管狹窄、椎間盤突出、脊柱不穩(wěn)等。雖然目前導致椎間盤退變的確切機制還不清楚，但大多數學者認為椎間盤的退變是多因素共同作用的結果。椎間盤細胞數量的減少以及細胞外基質成分的改變是椎間盤退變的病理生理基礎，而髓核及纖維環(huán)細胞的凋亡是椎間盤細胞減少的主要原因。研究發(fā)現退變的椎間盤組織能夠產生大量的炎癥因子，其中IL-1β是一種能導致炎癥

2、反應及細胞凋亡的多效性細胞因子，在椎間盤細胞凋亡中起重要作用。臨床觀察發(fā)現絕經后婦女與同年齡男性相比，椎間盤退行性疾病的發(fā)病率較高，提示雌激素與椎間盤退變有關。近年來，研究發(fā)現雌激素有抗軟骨細胞及胰腺β細胞凋亡的作用，雌激素是否有抗椎間盤細胞凋亡的作用未見報道。本文的目的是探討17β-雌二醇是否有抑制IL-1β誘導的大鼠纖維環(huán)細胞凋亡的作用及是否有濃度依賴性。
　　方法:酶消化法原代培養(yǎng)大鼠纖維環(huán)細胞，細胞貼壁融為單層時，用0.2

3、5％Ⅱ型膠原酶及0.2％胰酶（含0.02％ EDTA）消化，細胞傳代至第3代，用不含胎牛血清和酚紅的DMEM/F12培養(yǎng)液培養(yǎng)，按以下分為六組:(1)組1，空白對照組;(2)組2，IL-1β誘導組;(3)組3，0.1μ mol/L雌激素組;(4)組4，1μ mol/L雌激素組;(5)組5，10μ mol/L雌激素組;(6)組6，ICI182，780抑制劑組，每組均為6個樣本。細胞培養(yǎng)24 h使細胞生長同步，加入相應藥物培養(yǎng)24h后收獲細

4、胞。應用:(1)倒置顯微鏡下觀察凋亡細胞形態(tài);(2)流式細胞術及Caspase-3活性檢測細胞凋亡;(3) MTT法檢測細胞增殖活性。
　　結果:(1)倒置顯微鏡下可見凋亡的纖維環(huán)細胞萎縮，包膜起泡及細胞核固縮。(2)流式細胞術檢測纖維環(huán)細胞凋亡率:組1為3.47％±0.25％;組2為18.80％±0.99％;組3為12.97％±0.61％;組4為8.67％±0.74％;組5為6.00％±0.61％;組6為18.57％±0.51％

5、。組1、組2、組5、組6之間細胞凋亡率差異有統計學意義（F=237.21，P＜0.001），組5凋亡率低于組2(P＜0.001)和組6(P＜0.001)，組2和組6之間差異無統計學差異;組1、組2、組3、組4、組5之間細胞凋亡率差異有統計學意義(F=474.78，P＜0.001)，組3、組4、組5細胞凋亡率逐漸下降。Caspase-3活性檢測結果顯示:組2 Caspase-3活性明顯降低，組3、組4、組5 Caspase-3活性逐漸上升

6、，組6 Caspase-3活性降低。(3)細胞增殖活性:各組OD值（吸光度）:組1為71.31％±1.31％;組2為26.74％±1.85％;組3為42.13％±2.10％;組4為53.68％±2.71％;組5為62.89％±3.12％;組6為32.14％±2.25％。組1、組2、組5、組6之間細胞增殖活性差異有統計學意義(F=340.95，P＜0.001)，組5增殖活性大于組2(P＜0.001)和組6(P＜0.001)，組2和組6之間