藍藻藻藍蛋白和變藻藍蛋白生物合成的研究.pdf

1、華中科技大學博士學位論文藍藻藻藍蛋白和變藻藍蛋白生物合成的研究姓名：蘇平申請學位級別：博士專業(yè)：環(huán)境工程指導教師：趙開弘20080527華中科技大學博士學位論文華中科技大學博士學位論文II外吸收峰的位置在662nm左右，證明所連接的色素為PCB。在紫外光的照射下色素蛋白可以產生Zn熒光，證明PCB與脫輔基蛋白是正確的共價連接。根據光譜所得到的一系列的光譜參數(可見紫外吸收比、熒光量子產率、摩爾消光系數)都顯示了色素蛋白具有天然藻膽蛋白的

2、性質。同時我們還利用胰蛋白酶進行色素蛋白PCB與CpcB(C155I)和PecB(C155I)的水解實驗，水解后的色素肽的高效液相色譜與從天然魚腥藻PCC7120中所得到的CpcB和PecB水解多肽的HPLC圖譜相近，可以證明利用大腸桿菌體內重組所得到的色素蛋白具有天然藻膽蛋白的性質。另外，CpeS催化CpcB(C84A)和PecB(C84S)與PCB的連接時，沒有正確的產物生成。以上研究均表明了CpeS可以催化CpcB(C155I)、

3、PecB(C155I)、CpcB和PecB中Cys84與PCB的偶聯。參照CpeS催化CpcB(C155I)和PecB(C155I)與PCB的體外重組的最佳反應體系，將天然的CpcB(PecB)與PCB進行重組，得到的色素蛋白與PCBCpcB(C155I)和PCBPecB(C155I)相比，特征峰有2～3nm的紅移。研究了變藻藍蛋白脫輔基蛋白ApcA、ApcB、ApcA2、ApcD、ApcF與PCB的大腸桿菌體內重組。本研究利用雙克隆載

4、體，將脫輔基蛋白ApcA(ApcB、ApcA2、ApcD、ApcF)、裂合酶CpeS、血紅素氧化酶HO1、膽綠素還原酶PcyA在大腸桿菌中共同表達，重組后色素蛋白PCBApcA、PCBApcB、PCBApcA2、PCBApcD和PCBApcF具有特征的紫外可見吸收和熒光光譜，分別為618nm642nm、612nm640nm、622nm642nm、650nm663nm(602nm635nm)和622nm644nm。色素蛋白的酸性尿素變性實

5、驗表明，變性后峰的位置在660～664nm左右，證明所連接的色素為PCB。在紫外光的照射下色素蛋白可以產生Zn熒光，證明PCB與脫輔基蛋白是正確的共價連接。根據光譜所得到的一系列的光譜參數(可見紫外吸收比、熒光量子產率、摩爾消光系數)都顯示了色素蛋白具有天然藻膽蛋白的性質。利用胰蛋白酶進行色素蛋白PCBApcA和PCBApcB水解實驗，水解后的色素肽的高效液相色譜與從天然魚腥藻PCC7120中所得到的APC水解多肽的HPLC圖譜相似，證

6、明利用大腸桿菌體內重組所得到的色素蛋白具有天然藻膽蛋白的性質。色素蛋白Zn電泳在紫外光的照射下可以產生Zn熒光，證明色素PCB與脫輔基蛋白是正確的共價連接。色素蛋白的圓二色光譜具有天然藻膽蛋白的性質，可見區(qū)CD顯示的是與脫輔基蛋白所連接的色素的構象，分別在350nm和600nm左右有特征的吸收峰。紫外區(qū)顯示的是色素蛋白多肽鏈的構象，其中PCBApcA、PCBApcB、PCBApcD和PCBApcF和其他藻膽蛋白一樣是α螺旋，只有PCBA