吉祥草主要抗腫瘤活性成分甾體皂苷的代謝初步研究.pdf

1、吉祥草為百合科植物吉祥草Reineckia carnea(Andr．)kunth［Sanseviera An-dr］的全草，又名觀音草、玉帶草、小葉萬年青等，具有涼血止血、清肺止咳、解毒利咽等功效，常用于治療肺熱咳嗽、咳血、慢性支氣管炎、哮喘、風濕性關節(jié)炎及跌打損傷等。研究表明，吉祥草全草主要含有甾體皂苷類、黃酮類、萜類、木脂素、有機酸等多種化學成分，其中甾體皂苷類化合物是其藥理作用的主要物質(zhì)基礎。甾體皂苷是一類由螺甾烷類化合物與糖結合

2、的寡糖苷，現(xiàn)代研究表明，甾體皂苷類化合物有多種藥理作用，特別在抑制腫瘤、降血糖血脂、防治心血管疾病和免疫調(diào)節(jié)等方面。
　　本課題組前期從吉祥草根莖乙酸乙酯部位分離得到了一個甾體皂苷RCE-4，研究表明RCE-4具有良好的誘導腫瘤細胞凋亡的作用，尤其對人宮頸癌細胞（Caski）、人肝癌細胞（HepG2）、人神經(jīng)母細胞瘤細胞（SHSY-5Y）有明顯的增殖抑制作用，IC50值分別為3.71、14.54、19.04μM，而對正常細胞基本無

3、毒。因此我們將RCE-4作為一個非常有潛力的抗腫瘤藥物，進一步對其藥效、毒理及代謝過程進行研究。本實驗室前期對RCE-4誘導Caski細胞凋亡的作用機制進行的大量研究表明，RCE-4可通過PI3K/Akt/NF-κB/炎癥因子途徑、抑制Survivin（生存素，一種凋亡抑制蛋白）、線粒體凋亡通路和激活細胞自噬來發(fā)揮其抗Caski作用，這些途徑可能是其發(fā)揮抗腫瘤作用機制之一(如圖1)。然而，RCE-4在生物體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄特點

4、仍然未知。因此，本課題擬對吉祥草中以RCE-4為主的主要甾體皂苷成分展開體內(nèi)外藥物代謝研究，為藥物的早期階段研究提供一定的理論依據(jù)。
　　1.吉祥草抗腫瘤活性成分的富集。以RCE-4為目標物，采用正反相硅膠柱色譜、重結晶、高效液相色譜從吉祥草根莖乙酸乙酯部位分離得到吉祥草主要抗腫瘤活性成分甾體皂苷，利用氣相色譜、紅外、質(zhì)譜、核磁共振（氫譜、碳譜、HSQC、HMBC和TOCSY等）等波譜技術和化學方法鑒定了其中2個化合物為甾體皂苷，

5、結構分別為25(S)-5β-spirostan-1β,3β-diol1-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-xylopyranoside(ZJY-E-1)、25(S)-5β-spirostan-1β,3β-diol1-O-α-D-arabinopyranosid-(1→2)-β-L-Rhamnopyranosyle(ZJY-E-2)。
　　2.吉祥草甾體皂苷的抗腫瘤活性研究。MTT法檢測吉祥草中兩種不同

6、成分的甾體皂苷混合物和其中的兩個甾體皂苷單體ZJY-E-1和ZJY-E-2對Caski細胞的細胞毒活性，結果顯示混合物I、混合物II、ZJY-E-1和ZJY-E-2對Caski細胞的IC50分別為7.53、8.07、15.14、18.36μM/L。ZJY-E-1、ZJY-E-2均為螺甾烷醇型甾體皂苷，僅存在糖鏈的差別，由此可見糖鏈的不同對于甾體皂苷的抗腫瘤活性具有很大影響。
　　3.吉祥草甾體皂苷在Caski細胞的代謝研究。建立了

7、以RCE-4為主的吉祥草甾體皂苷測定的LC-MS/MS方法，此方法專屬性強，在規(guī)定條件下不受其他內(nèi)源性物質(zhì)干擾，靈敏性較高。觀察給藥后Caski細胞狀態(tài)，發(fā)現(xiàn)2h時細胞形態(tài)開始從梭形趨向圓形，慢慢死亡；利用LC-MS/MS技術分析吉祥草甾體皂苷在Caski細胞的代謝產(chǎn)物，發(fā)現(xiàn)了4種可能的代謝方式和8個可能的代謝產(chǎn)物。
　　4.吉祥草甾體皂苷灌胃給藥SD大鼠后的入血成分研究。首先驗證供試品溶液的短期、長期及凍融穩(wěn)定性，均符合實驗要求