C8orf84在膀胱癌細胞中的功能研究.pdf

1、目的：
　　明確C8orf84在膀胱癌細胞中的生物學功能；確定C8orf84是否是膀胱癌新的候選抑癌基因。
　　材料與方法：
　　構建重組慢病毒表達細胞模型，采用PCR和Westernblot分別檢測C8orf84在重組慢病毒表達細胞模型中的mRNA和蛋白表達水平；CCK-8法和平板克隆形成實驗檢測細胞增殖；Transwell小室法進行細胞遷移和細胞侵襲實驗；AnnexinV/PI雙染法檢測細胞凋亡以及PI染色法檢測細

2、胞周期。實驗數據均采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行數據分析處理，所有定量實驗至少獨立重復2-3次，圖中的數據為平均值±標準差（mean±S.D.）。轉染不同病毒的細胞株之間的表達差異、細胞的轉染效率、細胞增殖、細胞遷移和侵襲、細胞凋亡、細胞周期的差異采用Independentsamplet-test檢驗。P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義，P<0.001為差異具有顯著的統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　熒光效率檢測結果顯示：轉染了

3、C8orf84過表達慢病毒及陰性對照病毒的膀胱癌細胞株，達最高轉染效率時間為轉染病毒后第4天左右；維持最高轉染效率時間為3天左右；轉染效率大于80％。PCR及Westernblot結果顯示：5637和T24的C8orf84過表達組細胞的表達水平高于空載體組細胞。細胞增殖結果顯示：5637和T24的C8orf84過表達組細胞生長曲線均明顯低于空載體組。5637的C8orf84過表達組細胞克隆數為91，空載體組為347，克隆形成率分別為1.

4、82%、6.94%（P<0.001）。T24的C8orf84過表達組細胞克隆數為35，空載體組為138，克隆形成率分別為0.7%、2.76%（P<0.001）。得出結論，C8orf84抑制膀胱癌細胞的增殖。細胞遷移結果顯示：C8orf84過表達組細胞遷移進入下室的細胞數量明顯少于空載體組細胞。醋酸洗脫遷移細胞測吸光值統(tǒng)計其平均吸光值分別為5637細胞組：0.0926（C8orf84過表達組）、0.1418（空載體組）（P<0.001）；

5、T24細胞組：0.0760（C8orf84過表達組）、0.1145（空載體組）（P<0.001）。得出結論，C8orf84抑制膀胱癌細胞的遷移。細胞侵襲結果顯示：C8orf84過表達組細胞遷移進入下室的細胞數量明顯少于空載體組細胞。醋酸洗脫遷移細胞測吸光值統(tǒng)計其平均吸光值分別為5637細胞組：0.0726（C8orf84過表達組）、0.8885（空載體組）（P<0.001）；T24細胞組：0.0917（C8orf84過表達組）、0.09

6、80（空載體組）（P<0.001）。得出結論，C8orf84抑制膀胱癌細胞的侵襲。細胞凋亡結果顯示：早期凋亡細胞所占比例分別為5637細胞組：26.7%（C8orf84過表達組）、6.15%（空載體組）（P<0.001）；T24細胞組：17.5%（C8orf84過表達組）、5.85%（空載體組）（P<0.001）。得出結論，C8orf84促進膀胱癌細胞的凋亡。
　　結論：
　　C8orf84抑制膀胱癌細胞的增殖；C8orf8