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文檔簡介
1、鹵蟲(Artemia)屬于甲殼綱(Crustasea),鰓足亞綱(Branchiopoda),無甲目(Anostacea),鹵蟲科(Artemidae),鹵蟲屬(Artemia),通常分布于內陸鹽湖和海岸鹽田中。本研究采用mRNA差異顯示方法分離中國孤雌生殖鹵蟲早期胚胎發(fā)育相關基因。以發(fā)育0h、4h、8h、12h、16h和10d的中國孤雌生殖鹵蟲的總RNA為模板,用Oligod(T)13M(M分別為A、C、G)3種錨定引物和26種隨機引
2、物組合進行DDRT-PCR,經6%非變性PAGE凝膠電泳后,用硝酸銀染色顯示差異條帶,共得到286條胚胎發(fā)育相關差異DNA片段,片段長度250-2000bp左右。對其中24條差異片段進行克隆測序,測序結果通過GenBank/EMBL/DDBJ/進行BLAST檢索分析。結果發(fā)現Seq1、Seq2片斷與已知基因有較高的同源性,其余片段與已知基因同源性較低。其中Seq1序列與編碼羅非魚的肌酸激酶基因有較高的同源性,517個堿基中有482個堿基
3、是相同的,同源性達到了92%,Score=747,E=0。用BLASTX進一步比對表明:Seq1序列與羅非魚的肌酸激酶有很高的同源性,部分序列同源性達到了88%,Score=300,E=3e-80。分離膠顯示該基因在孤雌生殖鹵蟲胚胎發(fā)育至16h、10d時表達量增多。RT-PCR和測序結果進一步證明在鹵蟲胚胎發(fā)育至16h和10d時Seq1基因確實存在。Seq1為編碼中國孤雌生殖鹵蟲肌酸激酶基因的一部分,該基因與中國孤雌生殖鹵蟲早期胚胎發(fā)育
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