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文檔簡介
1、共軛亞油酸(Conjugated linoleic acid,CLA)是一類在9-與11-位、10-與12-位或11-與13-位碳原子處有順式或反式共軛雙鍵的十八碳二烯酸。在共軛亞油酸的各種異構體中,只有c9,t11-18:2和t10,c12-18:2兩種異構體具有多種生理活性,如抗癌、抗粥狀動脈硬化、抗氧化、降低膽固醇、減肥、促進生長等,因而在食品、保健品、醫(yī)藥、化妝品等領域有著廣闊的應用前景。一些微生物可以產生共軛亞油酸異構酶(Co
2、niugatedlinoleic acid isomerase),該酶能專一性地催化亞油酸轉化為活性共軛亞油酸異構體的反應,因此近幾年來倍受關注,利用生物法制備共軛亞油酸已成為今后共軛亞油酸工業(yè)合成的發(fā)展趨勢。 本文首先利用Blast(NCBI)、Bioediter等生物學軟件,根據已公布的嗜酸乳桿菌NCFM基因組序列和羅伊氏乳桿菌共軛亞油酸異構酶的核苷酸序列,預測了嗜酸乳桿菌中共軛亞油酸異構酶的序列。之后根據所預測的嗜酸乳桿菌
3、共軛亞油酸異構酶基因序列以及載體pET30a(+)的物理圖譜設計了一對引物,對嗜酸乳桿菌AS1.1854基因組進行PCR擴增,得到一條1776bp的目的條帶,并構建了pET30a(+)/共軛亞油酸異構酶重組質粒,將重組質粒導入表達載體大腸桿菌BL21(DE3)ptYS中。 通過對表達條件進行優(yōu)化,采取誘導溫度16℃,誘導劑IPTG濃度0.1mmol/L,對含有重組質粒的BL21(DE3)pLYS進行誘導表達,首次表達出了可溶性的
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