組蛋白乙?；隗w細(xì)胞克隆牛肺臟中的研究.pdf

1、1997年克隆羊"多莉"誕生之后,大批的克隆動物如鼠、牛、羊和豬等相繼問世,但遺憾的是克隆的成功率迄今為止仍然很低.大量的研究表明,克隆動物在核移植后其染色質(zhì)的再程序化表現(xiàn)異常,使細(xì)胞不能成功地通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄活性而有效地控制其發(fā)育分化.這些染色質(zhì)的再程序化包括DNA的甲基化和核小體組蛋白的乙酰化等.組蛋白乙?；谌旧|(zhì)結(jié)構(gòu)調(diào)節(jié)、DNA復(fù)制、基岡轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞分化及癌細(xì)胞發(fā)育都有研究,但在克隆動物中卻是一個有待深入探索的領(lǐng)域.在報道的克隆牛發(fā)育

2、異常中,肺臟的異常比較普遍和明顯,而在我們的克隆牛工作中也發(fā)現(xiàn)了類似問題,所以我們選用克隆牛肺臟組織作為實驗材料,進(jìn)行組蛋白乙酰化研究.在我們的克隆牛組蛋白乙?；瘜嶒炛?使用組蛋白乙?；庖叱恋矸磻?yīng)技術(shù)和定量PCR技術(shù),共分析了18個樣品和15個基岡,這些樣品包括9N1,9N3,9N4,8C1,8C2,8C3,8C4,9C1,9C2,9C3,9C4,9C5,9C6,9C8,9C12,Jiumei,Benben和Xiaobai等;這些基因

3、包括β-Actin,BMP4,EGF,FGF,FGFBP,FGFR,GH,GHR,Gli2,HGF,HGFR,IGF1,RAR,SHH和VEGF等.我們發(fā)現(xiàn):(1)在克隆牛中組蛋白乙?；交旧隙加兴档?(2)克隆牛Xiaobai乙酰化水平比正常牛低,而基本上是高于或接近死亡克隆牛水平的;(3)在我們所研究的三個供體細(xì)胞系(卵丘細(xì)胞,成體成纖維細(xì)胞和胎兒成纖維細(xì)胞)中,乙?；綗o明顯差異.我們還分析了相關(guān)生長因子在克隆牛中的表達(dá)狀

4、況,共分析了13個樣品和7個基因,這些樣品包括9N1,9N3,9N4,8C1,9C3,9C4,9C5,9C6,9C8,9C12,Jiumei,Benben和Xiaobai等;基岡包括BMP4,FGF10,FGFBP,FGFR,IGF1,SPA和VEGF等.我們發(fā)現(xiàn)基因表達(dá)的水平變化較大,有些基因的表達(dá)水平提高了,如BMP4,IGF1,SPA和VEGF,而有些有所降低,如FGF10,FGFBP和FGFR等.對克隆牛中組蛋白乙酰化水平和基岡

5、在克隆牛中的表達(dá)水平對比分析,我們發(fā)現(xiàn)兩者并沒有某種一致的聯(lián)系.組蛋白乙?；诨蛘{(diào)節(jié)中只是提供了一個微環(huán)境,屬于粗略調(diào)節(jié),只要具備一定的水平即可進(jìn)一步引發(fā)其他因子的參與,來精確調(diào)節(jié)基岡的表達(dá).而在克隆牛中組蛋白乙酰化水平雖然有所降低,但如果這種降低仍然為基因的表達(dá)提供了足夠的基礎(chǔ),這就對基因的正常表達(dá)造不成很大影響;但如果組蛋白乙?；竭^高或過低,可能要影響到其他因子的作用,從而影響了基因表達(dá)的調(diào)節(jié),最終導(dǎo)致生物個體發(fā)育異常.為研究

6、基因不同區(qū)域的組蛋白乙?；?我們選取了正常牛4N1,6N1,9N3,克隆牛Xiaobai和9C4共五個樣品,IGFI和GH兩個基岡作為研究對象,在它們的基因序列上分別設(shè)計了14對和8對引物來進(jìn)行定量分析.通過我們的實驗,我們認(rèn)為無論基因表達(dá)與否,都首先在其基因組上維持了一定的組蛋白乙?；?這種乙酰化水平同時也是一個整體的概念,而且在不同的基因區(qū)域上,組蛋白乙?；绞怯幸欢ǖ牟▌有?另外這種乙?；娇梢噪S著發(fā)育階段的不同根據(jù)基