中藥誘導成纖維細胞凋亡及防治腹膜粘連研究.pdf

1、目的：腹膜粘連多由創(chuàng)傷及炎癥引發(fā)，經(jīng)過一系列復雜過程，最終形成腹膜纖維性粘連導致術后嚴重并發(fā)癥。通過對已形成的腹膜粘連組織進行多種病理組織染色后的病理形態(tài)觀察，以明確腹膜纖維性粘連組織的構成及結構特點，旨在尋求防治腹膜粘連的作用位點；通過對腹膜粘連的動物模型中藥丹皮持續(xù)給藥，觀察其作用后粘連組織病理形態(tài)的改變，以探討其對腹膜粘連治療中的防治意義；從而進一步研究中藥丹皮對腹膜粘連成纖維細胞增殖及凋亡的影響，以探討中藥丹皮對腹膜粘連的作用機

2、理，為臨床防治腹膜粘連提供細胞學理論依據(jù)。
　　 方法：收集2009年12月至2010年11月2例天津兒童醫(yī)院確診腹膜粘連性腸梗阻住院病人手術中取的粘連組織標本，進行HE染色、V-G染色及Masson三色染色三種病理組織染色，光鏡下觀察腹膜粘連組織的病理形態(tài)特點，分辨其間的成纖維細胞及膠原形態(tài)及結構；此后取健康Wistar大鼠60只，隨機分為3組，每組20只。進行以下實驗：A組：創(chuàng)傷+感染粘連組，鉗夾腸壁后并于腹腔內(nèi)注入大腸桿菌

3、O11b4造模；B組：創(chuàng)傷+感染+中藥組，在A組的基礎上，術后12h丹皮4g灌胃。灌胃容量為4ml，每日1次；C組：正常組，開腹后未作其他處理即關腹，作為空白對照組。均于術后14d處死大鼠，觀察腹膜粘連大體情況，并評定粘連分級，取粘連部位組織行HE染色。利用Ridit分析行粘連分級的統(tǒng)計學分析；進而對腹膜粘連成纖維細胞進行體外培養(yǎng)實驗，采用倒置相差顯微鏡、細胞計數(shù)、流式細胞儀及試劑盒等方法進行觀察、分析，以研究丹皮對腹膜粘連成纖維細胞生

4、物學行為以及凋亡的影響。
　　 結果：腹膜粘連組織中主要細胞為間皮細胞、成纖維細胞，大量以膠原為主的間質增生，其間可見少量炎癥細胞等，并有小血管長入；間皮細胞位于粘連組織的外層，其內(nèi)大量膠原無序排列，其間夾雜大量梭形成纖維細胞及纖維細胞。動物實驗中大體粘連分級A組>B組>C組，HE染色發(fā)現(xiàn)給藥組粘連程度明顯輕于腹膜粘連模型組，其鏡下表現(xiàn)粘連組織中成纖維細胞及膠原增生程度減輕；中藥丹皮口服治療，可以明確降低腹膜粘連程度和減少粘連帶

5、的形成，其機制可能與調控成纖維細胞的增殖和凋亡平衡相關；而體外培養(yǎng)的腹膜粘連成纖維細胞，加入丹皮后在倒置相差顯微鏡、細胞計數(shù)、流式細胞儀以及Annexin V FITC/PI測定下，與對照組比較，細胞表現(xiàn)為生長趨勢及增殖活性被明顯抑制，而對細胞凋亡有誘導作用。
　　 結論：成纖維細胞及其分泌的膠原等細胞外基質是粘連組織的基礎結構；丹皮對成纖維細胞的生長趨勢及增殖活性有明顯抑制作用，誘導成纖維細胞凋亡。提示中藥丹皮是成纖維細胞負性