過量表達甜菜BvNHX1基因及擬南芥AtNHX5基因對擬南芥耐鹽性的影響.pdf

1、山東師范大學碩士學位論文過量表達甜菜BvNHX1基因及擬南芥AtNHX5基因對擬南芥耐鹽性的影響姓名：安靜申請學位級別：碩士專業(yè)：發(fā)育生物學指導教師：趙彥修20060410山東師范大學碩士學位論文過量表達甜菜BvNHXl基因及擬南芥4趴丑Ⅺ基因對擬南芥耐鹽性的影響安靜(山東師范大學生命科學學院，濟南，250014)摘要在鹽脅迫環(huán)境中，植物細胞的離子均衡受到破壞，尤其是胞質中過多的Na十，對植物細胞的代謝產生毒害。植物獲得耐鹽能力的一個重

2、要策略是建立新的離子均衡。離子均衡涉及鈉離子的吸收、外排、區(qū)隔化和長距離轉運。植物的耐鹽往往要求地上部分保持低Na、高K十的狀態(tài)，維持細胞質內低Na狀態(tài)最直接的方法是將Na區(qū)隔化到液泡中，Na區(qū)隔化對植物耐鹽至關重要，而植物液泡膜Na／rt逆向轉運蛋白是植物細胞中Na區(qū)隔化至液泡的關鍵基因，它能利用液泡膜HATPase及PPiase泵盯產生的驅動力，逆著Na濃度梯度，將胞質中的Na區(qū)隔化進液泡中。在多種植物中過量表達液泡膜Na十／I逆向

3、轉運蛋白都明顯提高了轉基因植物的耐鹽性。甜菜Na／H逆向轉運蛋白是組成性表達的，但鹽誘導條件下其轉運活力增強，酵母互補試驗證明它能恢復酵母突變體液泡膜NaAt逆向轉運蛋白的活性。本試驗所研究的BvNHXl基因是從甜菜eDNA中克隆所得，它編碼一個液泡膜Na／H逆向轉運蛋白，主要負責Na的區(qū)隔化。本實驗利用植物表達載體pROKII和農桿菌GV3101將BvNHXl(全長1659bp)、AtNHX5(全長1554bp)基因在擬南芥中過量表達

4、。在含40mg／L卡那霉素的培養(yǎng)基上篩選獲得BvNHXl和AtNHX5的純合轉化子，并對其進行了分子鑒定和耐鹽性分析。BvNHXl和AtNHX5的純合轉化子的分子鑒定及耐鹽性分析結果如下：1Southern雜交結果顯示，野生型植株(對照)沒有明顯的雜交信號，轉基因株系有強陽性信號。表明BvNHXl、AtNHX5的確已經整合到擬南芥的基因組中，但不同株系插入拷貝數(shù)不等。2Northern雜交結果顯示有雜交信號，表明插入擬南芥中的BvNHX