P38絲裂原活化蛋白激酶途徑介導鈉激活鉀離子通道(KNa)參與坐骨神經痛炎癥機制的研究.pdf

1、本文分為以下幾個部分進行探討：
　　第一部分:坐骨神經痛患者血清中抗炎和促炎細胞因子的表達
　　目的:坐骨神經痛與血清中炎癥細胞因子的差異性表達有關，但具體機制尚未完全闡明。本研究，將重度坐骨神經痛患者的血清促炎細胞因子和抗炎細胞因子表達水平，與輕度坐骨神經痛和健康受試者的血清水平進行比較，試圖發(fā)現(xiàn)坐骨神經痛機制的表象規(guī)律。
　　方法:在這項前瞻性研究中，檢測58例重度坐骨神經痛，50例輕度坐骨神經痛患者和30例健康受

2、試者血清中的促炎(白細胞介素-6，8和腫瘤壞死因子-α)和抗炎細胞因子(白細胞介素-4，10)表達水平。對入組患者使用功能障礙指數(shù)量表和Short-36(SF-36)問卷確定身心健康狀態(tài)。最后計算從調查問卷中獲得的評分與血清細胞因子水平之間的相關性。根據VAS評分分成兩組:重度坐骨神經痛組(VAS＞3分)和輕度坐骨神經痛組(VAS≤3分)，健康受試者作為對照組。
　　結果:三組都能檢測出白細胞介素-6，重度坐骨神經痛患者的中位數(shù)水

3、平高于輕度坐骨神經痛組(P=0.02)和對照組(P=0.03)。坐骨神經痛患者的白細胞介素-8中位數(shù)水平高于對照組(P=0.001，重度坐骨神經痛組vs對照組;P=0.02，輕度坐骨神經痛vs對照組)。重癥坐骨神經痛組的腫瘤壞死因子-α蛋白值高于輕度坐骨神經痛組(P＜0.01)和對照組(P＜0.01)。與對照組相比，輕度坐骨神經痛的白細胞介素-4中位數(shù)水平高達2.5倍(P＜0.01)，重度坐骨神經痛患者(P=0.012)高出約2倍。與重

4、度坐骨神經痛(P＜0.01)和對照組相比，輕度坐骨神經痛患者的白細胞介素-10表達水平顯示出較高的趨勢(P＜0.01)。功能障礙指數(shù)與白細胞介素-6(r=0.394，P=0.013)，腫瘤壞死因子-α(r=0.629，P＜0.001)和白細胞介素-10(r=-0.415，P=0.009)顯著相關。功能障礙指數(shù)與白細胞介素-4無顯著相關性(r=-0.174，P=0.29)和白細胞介素-8(r=-0.133，P=0.418)。
　　結

5、論:炎癥細胞因子差異性的表達可能參與坐骨神經痛的發(fā)生機制。促炎癥細胞因子與疼痛呈正相關性，抗炎癥細胞因子與疼痛呈負相關性。
　　第二部分:腫瘤壞死因子-α通過p38 MAPK激活途徑調節(jié)大鼠的背角神經元中鈉激活的鉀通道SLICK
　　目的:脊髓背角(Dorsal horn，DH)是處理和傳播疼痛感覺的綜合中心。離子通道表達的異常變化可增強疼痛相關的DH神經元的興奮性。鈉激活鉀(KNa)通道在中樞神經系統(tǒng)中高度表達;然而，關于

6、大鼠DH神經元是否表達SLICK通道蛋白的研究尚未有報道，并且SLICK面對炎癥環(huán)境的直接反應和介導這種反應的潛在信號通路尚未被闡明。
　　方法:本實驗利用腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)誘導新生鼠的背角神經元細胞后，檢測鈉激活鉀通道的電流電壓，蛋白和基因的變化。然后，觀察并分析p38抑制劑SB202190能否拮抗這些變化，及其潛在機制。
　　結果: TNF-α抑制總外向鉀電流I

7、K和KNa電流，并能降低放電適應能力。然而，這種變化能被p38抑制劑SB202190抵消，從而表明通過p38絲裂原激活蛋白激酶途徑調節(jié)SLICK通道活性。無論是腫瘤壞死因子-α還是SB202190對SLICKmRNA均未產生變化，MTT實驗結果顯示使用SB202190與TNF-α組合對DH神經元的生存能力沒有影響。說明研究發(fā)現(xiàn)腫瘤壞死因子-α的調控作用機制不在通道門控的水平，而是在可能的翻譯后修飾水平。
　　結論:TNF-α在翻譯

8、后修飾的層面，通過激活p38絲裂原激活蛋白激酶途徑調控大鼠背角神經元中的鈉激活鉀通道SLICK。
　　第三部分:p38 MAPK途徑介導KNa通道參與坐骨神經痛機制的體內研究
　　目的:探討p38 MAPK抑制劑能否阻止自體髓核移植模型建立的異常性疼痛的進展或逆轉該病理過程;以及p38MAPK抑制劑用藥對大鼠脊髓背根神經節(jié)和脊髓背角中鈉激活的鉀離子通道的蛋白和基因表達變化影響。
　　方法:將SD大鼠隨機分為正常組、假手

9、術組以及自體髓核移植組。觀察記錄各組大鼠背根神經節(jié)和脊髓背角的鈉激活鉀通道蛋白及基因的表達，大鼠的機械、熱痛閾值。在自體髓核移植組中，給予三種濃度的p38MAPK抑制劑SB202190(0.3mg/kg，1.0mg/kg，3.2mg/kg)，生理鹽水作為對照，觀察給藥后大鼠機械、熱痛閾值以及鈉激活鉀通道蛋白基因的變化，將所得數(shù)據進行統(tǒng)計分析。
　　結果:自體髓核移植組的大鼠的機械和熱痛閾值，與正常組和假手術組，在每個術后時間點相比

10、均顯著降低(P＜0.05)。SLICK mRNA和SLACK mRNA在自體髓核移植大鼠中均明顯降低(P＜0.05)，與p38 mRNA的趨勢相反。蛋白免疫印跡分析顯示與基因變化一致。SB202190鞘內注射時，大鼠的機械和熱痛敏行為在術后第2天明顯改善(P＜0.01)。SB202190也顯著提高鈉激活鉀通道蛋白表達水平，但對轉錄活動不起作用。
　　結論:抑制脊髓p38 MAPK通路激活，提高鈉激活的鉀離子通道的表達可改善坐骨神經