Snail在腎小管上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：從組織和細(xì)胞水平上探討Snail的表達(dá)與腎小管上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）及腎間質(zhì)纖維化（TIF）中的關(guān)系；觀察轉(zhuǎn)染Snail基因后人腎小管上皮細(xì)胞（HK-2） miRNA表達(dá)譜的變化。
　　方法：（1）采用HE、PAS、PASM、Masson染色評(píng)估40例IgA腎病患者腎穿組織腎小管間質(zhì)病理變化，根據(jù)腎小管萎縮及間質(zhì)纖維化程度分為輕度、中度、重度三組，選取4例正常腎臟組織作為對(duì)照，采用免疫組化方法檢測(cè)Snail及EMT相關(guān)蛋白V

2、imentin、SMA、E-cadherin的表達(dá)。（2）構(gòu)建過(guò)表達(dá)Snail的質(zhì)粒，采用陽(yáng)性脂質(zhì)體LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染HK-2細(xì)胞，24 h后倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化。（3）將體外培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞分為正常對(duì)照組、空轉(zhuǎn)染組、Snail基因轉(zhuǎn)染組。實(shí)時(shí)熒光定量（qPCR）檢測(cè)Snail基因的表達(dá)，RT-PCR及Western blot方法檢測(cè)Snail、Vimentin、SMA、E-cadherin蛋白和基因在

3、HK-2細(xì)胞中的表達(dá)。進(jìn)一步借助基因芯片篩選出差異表達(dá)的miRNAs。
　　結(jié)果：（1）免疫組化結(jié)果顯示，Snail、Vimentin及SMA在IgA腎病組織中高表達(dá)，E-cadherin在IgA腎病組織中低表達(dá)；IgA腎病組織中Snail與Vimentin及SMA蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)，與E-cadherin蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)；且TIF程度越高，Snail蛋白表達(dá)越高。（2）經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建出過(guò)表達(dá)Snail的質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染24

4、 h后借助倒置顯微鏡觀察，空白對(duì)照組及空轉(zhuǎn)染組HK-2細(xì)胞形態(tài)呈鋪路石樣，Snail基因轉(zhuǎn)染組中HK-2細(xì)胞形態(tài)呈紡錘形，間隙增寬，兩者形態(tài)上差別明顯。（3）qPCR結(jié)果顯示，Snail轉(zhuǎn)染組中Snail mRNA的相對(duì)表達(dá)量明顯高于空白對(duì)照組及空轉(zhuǎn)染組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.01）。RT-PCR及Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，Snail轉(zhuǎn)染組Snail、Vimentin、SMA在基因和蛋白水平表達(dá)均升高，E-