成熟紅細胞天齡與功能的相關性研究.pdf

1、目的：探究成熟紅細胞正常代謝過程中功能隨細胞天齡增加而呈現(xiàn)的變化規(guī)律,明確紅細胞天齡與功能的相互關系,為進一步研究紅細胞在保存過程中隨保存時間的延長其功能變化規(guī)律、明確不同保存時間紅細胞的功能劑量、實現(xiàn)紅細胞量化輸注、為提高紅細胞輸注的治療效果提供實驗數(shù)據(jù)。
　　 方法：⑴用非連續(xù)密度梯度分離法分離全血紅細胞:通過正交設計和多元回歸方程分析影響分離效果的各因素,優(yōu)化離心條件。⑵用分光光度法和流式細胞術測定紅細胞天齡:用前面建立優(yōu)

2、化的方法將新鮮全血標本離心分離為6個不同密度層次(1.085,1.088,1.089,1.091,1.092,1.094g/ml)的紅細胞部分,測定不同層次紅細胞內(nèi)丙酮酸激酶活性,通過各部分丙酮酸激酶活性與全血紅細胞丙酮酸激酶活性的比值(Ratio)推測各部分紅細胞平均天齡；測定各部分紅細胞膜表面磷脂酰絲氨酸(PS)表達陽性率,來反映紅細胞密度與衰老(天齡)的相關性。⑶紅細胞功能的檢測:用流式細胞儀技術檢測各分層紅細胞膜表面CR1受體的

3、表達情況；用紅細胞自然免疫粘附腫瘤細胞試驗檢測各分層紅細胞膜CR1受體粘附腫瘤細胞的活性；用分光光度法測定各分層紅細胞內(nèi)2,3-DPG濃度來初步評價紅細胞的攜氧能力。
　　 結果：①結果表明離心力大小、離心時間、標本紅細胞平均體積.待分離標本紅細胞濃度、個體年齡等因素均對分離結果有影響,其中平均紅細胞體積(MCV)的影響起主導作用。在離心條件的選擇上,根據(jù)分離效果將分離條件定為3500g,20min,4℃。分離后的各分層紅細胞,

4、從低密度層至高密度層,其平均紅細胞體積(MCV)逐漸減小(94.9±3.8fl-87.2±1.5fl),下降了8.11％；平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)呈遞增趨勢(282.5±17.9g/l-316.0±23.7g/l),增加了11.86％。②數(shù)據(jù)提示隨著紅細胞密度的增加,PS表達陽性率也逐漸增高:結合紅細胞PK比值評價,各分層紅細胞平均天齡由低密度層至高密度層依次為11.5、46.0、63.8、74.6、80.5、102.2 d。

5、③各天齡段紅細胞相關功能檢測結果顯示：各分層紅細胞(從低密度層至高密度層)細胞膜上CR1受體表達陽性率從73.71±13.62％減少至49.13±21.40％；紅細胞自然免疫粘附腫瘤細胞試驗花環(huán)率從61.0±11.7％減至27.0±8.2％；100個紅細胞中CD35分子表達陽性細胞數(shù)(CD35+)、CR1受體活性(Er％)及天齡(D)三者之間存在一定的相關性,其具體關系可用公式表示為:Er％=(61.691+0.11×CD35+-0.3

6、65×D)/100×100％；各分層紅細胞2,3-DPG濃度從6.15±0.78下降至3.73±0.48(mmol/L erythrocytes)。
　　 結論：⑴紅細胞的密度與天齡有著密切相關性。采用非連續(xù)密度梯度分離法與丙酮酸激酶活性評價相結合判斷紅細胞平均天齡,可作為紅細胞天齡與功能相關性研究的參考方法。⑵紅細胞CR1受體表達和活性的變化以及2,3-DPG的變化與紅細胞天齡有著密切相關性。⑶紅細胞天齡與其主要功能(攜氧功能