激動GABAC受體對大鼠癲癇發(fā)作及腦內(nèi)GABA、GAT1和ρ2mRNA表達的影響.pdf

1、目的：探討癲癇發(fā)作期、自行終止發(fā)作過程中及終止發(fā)作后7天內(nèi)大鼠腦內(nèi)γ-氨基丁酸（GABA）、γ-氨基丁酸運轉(zhuǎn)體1（GAT1）和GABAC 受體ρ2mRNA表達的動態(tài)變化規(guī)律。研究激動GABAC 受體對癲癇發(fā)作、癇性放電和大鼠腦內(nèi)海馬區(qū)GABA、GAT1及ρ2mRNA表達的影響，查明激動GABAC 受體在內(nèi)源性抗癲癇機制中的作用。
　　 方法：建立大鼠運動皮層定位注射青霉素（PNC）誘發(fā)癲癇發(fā)作模型，以GABAA 受體阻斷劑（荷包

2、牡丹堿，BIC）、GABAB 受體阻斷劑（高牛黃酸，3APS）和GABAC 受體激動劑（蠅蕈醇，MUS）為工具藥，癲癇發(fā)作持續(xù)時間和Racine 癇性行為學分級作為效應指標；RM6240C 型多道生物信號采集處理系統(tǒng)同步記錄癲癇大鼠皮層腦電圖（EcoG）。于癲癇發(fā)作高峰，在阻斷GABAA，B 受體條件下腹腔注射(ip)MUS（1.0mg·kg-1），分析激動GABAC受體對癲癇發(fā)作及對EcoG 癇樣波潛伏期、發(fā)放頻率、最高振幅的影響。采

3、用免疫組化法測定癲癇發(fā)作高峰期及終止發(fā)作后即刻、1d、3d和7d 海馬區(qū)GABA和 GAT1含量；采用實時熒光定量聚合酶鏈反應技術(shù)在相同時間段測定GABAC 受體ρ2 mRNA表達變化。
　　 結(jié)果：（1）大鼠運動皮層定位注射青霉素后，均出現(xiàn)Ⅰ～Ⅲ級發(fā)作，EcoG 出現(xiàn)明顯的棘波和棘慢波。癲癇發(fā)作高峰期給予GABAA，B 受體阻斷劑，可延長發(fā)作持續(xù)時間，增強發(fā)作程度，并增加癇樣放電頻率和增大癇波振幅，與PNC 模型對照組比較，差

4、異均有顯著性（P<0.05）。激動GABAC 受體，能明顯縮短大鼠癲癇發(fā)作持續(xù)時間，減輕發(fā)作程度，同時減少相同時間內(nèi)癇樣波發(fā)放頻率，降低癇波最高振幅，分別與PNC 模型組及GABAA，B 受體阻斷劑組比較，差異均有顯著性（P<0.05）。
　　 （2）在青霉素誘發(fā)癲癇發(fā)作高峰期，大鼠海馬區(qū)GABA 含量降低（P<0.05），而GAT1表達增高（P<0.05）；癲癇發(fā)作自行終止期及終止發(fā)作后1-7天內(nèi)GAT1與GABA蛋白表達變化

5、呈同向性改變，即GAT1隨GABA 升高而升高，直到兩者趨近于正常水平。自行終止發(fā)作期兩者同時增高（P<0.05），于發(fā)作終止后24h下降，1-7天內(nèi)兩者的變化呈持續(xù)降低，但與正常對照鼠比較仍呈升高趨勢（P<0.05），第7天趨于正常。阻斷GABAA，B 受體后GAT1與GABA蛋白表達變化與PNC 模型對照組大鼠的變化趨勢相同，但兩者升高更明顯，與青霉素組比較，差異均有顯著性（P<0.05）；同時使GABA和GAT1含量的動態(tài)變化曲線

6、較PNC 模型對照組上移。激動GABAC 受體后GABA和GAT1含量變化與PNC模型對照組自行終止癲癇發(fā)作過程中變化趨勢相同，但第7天恢復正常。終止癲癇發(fā)作過程中GABA和GAT1含量增高（P<0.05）。但升高幅度低于PNC 模型對照組和GABAA，B受體阻斷劑組，其動態(tài)變化曲線相對于PNC 模型對照組呈現(xiàn)下移。
　　 （3）青霉素誘發(fā)癲癇發(fā)作高峰期大鼠海馬區(qū)ρ2mRNA表達下降（P<0.05），自行終止期及終止發(fā)作后1-3

7、天內(nèi)ρ2mRNA表達呈持續(xù)下降趨勢（P<0.05），第7天恢復正常；阻斷GABAA，B 受體，癲癇發(fā)作高峰期大鼠海馬區(qū)ρ2mRNA 含量降低，與PNC 模型對照組比較，差異無顯著性（P>0.05）；自行終止發(fā)作過程中ρ2mRNA表達升高（P<0.05），自行終止發(fā)作后24h下降，之后3天內(nèi)呈持續(xù)下降趨勢，第7天恢復正常。激動GABAC 受體后大鼠海馬區(qū)ρ2mRNA表達變化與應用GABAA，B 受體阻斷劑后ρ2mRNA表達變化趨勢相同；終

8、止發(fā)作過程中ρ2mRNA表達明顯升高（P<0.05），發(fā)作終止24h下降，之后3天內(nèi)呈持續(xù)下降趨勢，第7天回升，與PNC 模型對照組比較，差異無顯著性（P>0.05）。
　　 結(jié)論：（1）大鼠運動皮層定位注射青霉素誘發(fā)癲癇發(fā)作和癇性放電。GABAA，B 受體阻斷劑可增強青霉素誘發(fā)的癲癇發(fā)作程度及癇性放電發(fā)放頻率和癇波振幅，該效應與取消了GABAA，B 受體介導的CNS大多數(shù)的快速抑制反應有關(guān)。激動GABAC 受體可終止PNC與G

9、ABAA，B 受體阻斷劑協(xié)同誘發(fā)大鼠癲癇發(fā)作，抑制癇性放電。證明機體的內(nèi)源性抗癲癇系統(tǒng)中存在“雙重保險”機制。
　　 （2）在青霉素誘發(fā)癲癇發(fā)作高峰期，GABA 含量降低而GAT1增高；自行終止發(fā)作過程中及終止發(fā)作后1-7天內(nèi)GAT1作為腦內(nèi)GABA的調(diào)節(jié)體，與GABA蛋白表達的動態(tài)變化具有同向性改變。癲癇發(fā)作自行終止期兩者同時增高；發(fā)作終止后24h降低，但1-7天內(nèi)兩者較正常鼠仍呈持續(xù)升高趨勢，是避免復發(fā)的主要原因。
　

10、　 （3）阻斷GABAA，B 受體后GABA和GAT1含量較PNC 模型對照組顯著增高，自行終止發(fā)作后1-7天內(nèi)兩者的動態(tài)變化曲線上移，說明癲癇發(fā)作增強后，機體通過自身調(diào)節(jié)機制進一步促進腦內(nèi)GABA 釋放和GAT1表達，GAT1逆向轉(zhuǎn)運內(nèi)源性GABA 達突觸間隙，通過激動GABAC 受體，產(chǎn)生緩慢而持久的抑制效應，從而自行終止癲癇發(fā)作。
　　 （4）在阻斷GABAA，B 受體條件下激動GABAC 受體，使GABA和GAT1升高

11、幅度明顯低于GABAA，B 受體阻斷劑組和PNC 模型大鼠，動態(tài)變化曲線相對于PNC 模型組呈現(xiàn)下移，說明激動GABAC 受體后，使腦內(nèi)抑制性增強，減弱機體的自身調(diào)節(jié)機制，通過相對減少GABA 產(chǎn)生和GAT1表達，從而保持腦內(nèi)抑制與興奮處于平衡狀態(tài)。
　　 （5）青霉素誘發(fā)的癲癇模型中，癲癇發(fā)作可使大鼠腦內(nèi)海馬區(qū)ρ2mRNA表達持續(xù)下降。激動GABAC 受體使ρ2mRNA表達短暫上調(diào)，而終止癲癇發(fā)作后24h下降，1-3天內(nèi)ρ2m