Cox-2、Bcl-2、Fas蛋白在膽道不全梗阻大鼠膽總管上皮細胞中的表達及意義.pdf

1、背景與目的
　　膽道不全梗阻在膽道疾病中比較常見，它是由很多種病因引起的，比如膽管周圍組織炎癥、膽管內(nèi)結石、腫瘤、胰腺病變、寄生蟲、先天性膽道疾病等。從而引起梗阻性黃疸，導致體內(nèi)水電解質(zhì)酸堿平衡紊亂、內(nèi)毒素血癥、高膽紅素血癥，甚至引起肝腎功能損害以及凝血機制異常。良性膽道梗阻引起的長期膽汁淤積以及長期慢性狹窄性膽管炎最終都可以導致膽管癌的發(fā)生。目前，良性膽道梗阻引起膽管癌的分子生物學機制還不明確，但是在消化道惡性腫瘤，比如胃癌、結

2、直腸癌、食管癌，特別是膽管癌中Cox-2、Bcl-2蛋白的表達異常升高，而且Cox-2、Bcl-2蛋白的表達與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切的關系。因此對這些蛋白在良性膽道梗阻中的表達進行實驗研究就顯得很有必要。在這項研究中，應用免疫組織化學技術檢測膽總管不完全梗阻大鼠的Cox-2和Bcl-2、Fas蛋白在膽總管上皮細胞中不同時間的表達水平，觀察Cox-2和膽總管上皮細胞組織學變化的關系，在膽總管不完全梗阻時，其上皮細胞凋亡的調(diào)節(jié)機制。從而說明C

3、ox-2、Bcl-2是否有致膽道不全梗阻大鼠膽總管上皮細胞發(fā)生癌變的可能。
　　方法
　　選取60只健康清潔級Wistar大鼠，不區(qū)分雌雄，按照隨機對照原則分為兩組:A組40只，為膽總管不完全梗阻組，再分為4個亞組，每亞組10只;B組20只，為實驗對照組，再分為4個亞組，每亞組5只。A組的大鼠在全麻后行膽總管不完全結扎，建立動物實驗模型;B組的大鼠在全麻后僅僅游離膽總管，不做結扎。各組大鼠分別于術后3天、7天、14天、21天

4、采取門靜脈血并且切取近端膽總管標本，檢測血清總膽紅素(TBIL)數(shù)值的變化，HE染色法觀察膽總管組織形態(tài)學的改變，TUNEL法觀察膽總管上皮細胞凋亡水平，免疫組化法(SABC法)檢測大鼠膽總管上皮細胞中Cox-2、Bcl-2、Fas蛋白的表達水平。數(shù)據(jù)結果采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包進行分析，計量資料采用均數(shù)加減標準差（(x)±s）表示，兩組結果之間的比較采用t檢驗，多組之間的比較采用方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

5、　　結果
　　1.總膽紅素(TBIL)數(shù)值測定:實驗組（A組）隨著膽總管不全梗阻的時間延長，血清膽紅素數(shù)值呈逐漸增高趨勢，而對照組（B組）數(shù)值變化不顯著。實驗組（A組）與對照組（B組）的比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　2.膽總管上皮細胞組織形態(tài)變化:實驗組（A組）膽總管于不完全結扎后7天稍擴張，而且發(fā)現(xiàn)有較多的炎性細胞浸潤，術后21天發(fā)現(xiàn)膽總管擴張更加明顯，而且膽管壁明顯增厚，出現(xiàn)纖維組織和上皮組織增生，對照組（B組

6、）無明顯變化。
　　3.細胞凋亡水平變化:實驗組（A組）于術后3天即發(fā)現(xiàn)膽總管上皮細胞凋亡增加，而且隨著膽總管不全梗阻的時間延長，細胞凋亡數(shù)值呈明顯增高趨勢;對照組（B組）膽總管上皮組織中偶見凋亡細胞。A組與B組細胞凋亡數(shù)相比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　4.Cox-2、Bcl-2、Fas蛋白的表達結果:Cox-2蛋白在實驗組（A組）中的表達于術后3天和7天呈現(xiàn)弱陽性，14天、21天均呈現(xiàn)陽性表達;Cox-2蛋白在對

7、照組（B組）中均為陰性表達。Bcl-2蛋白在實驗組（A組）中隨著膽總管不全結扎的時間延長，其表達逐漸增強，術后3天為弱陽性表達，術后7天、14天均呈現(xiàn)陽性表達，術后21天呈現(xiàn)強陽性表達;而在對照組（B組）膽總管上皮細胞中Bcl-2的表達均為陰性。Fas蛋白在實驗組（A組）中的表達也隨著膽總管不全結扎的時間延長而逐漸增強，術后3天為弱陽性表達，術后7天、14天均呈現(xiàn)陽性表達，術后21天呈現(xiàn)強陽性表達;而在對照組（B組）膽總管上皮細胞中幾乎