人類鋅指蛋白新基因ZNF328的克隆與功能研究.pdf

1、　　轉錄因子在多種細胞功能中擔任了重要角色，包括細胞生長、增殖、凋亡和細胞內(nèi)的信號轉導。人們已經(jīng)鑒定了幾個大的轉錄因子家族。在哺乳動物中，含KRAB結構域的鋅指蛋白(KRAB-ZFP)家族是人類基因中最大的一類轉錄因子，研究表明許多KRAB-ZFP基因與心臟發(fā)育以及心血管疾病都有關系。我們從人類胚胎心臟cDNA文庫中克隆鑒定了一個鋅指基因，經(jīng)國際基因命名委員會批準命名為ZNF328。該基因全長4511bp，其開放閱讀框(ORF)長237

2、6bp，編碼了792個氨基酸，在N端含有一個KRAB框，C端含有15個C2H2型鋅指。ZNF328由8個外顯子組成，在基因組上跨越大約28kb，其中外顯子6、7分別編碼了KRAB框的A和B框；ZNF328位于染色體帶19q13.4上。Norternblot分析該蛋白在大部分的成體和胚胎組織中都有表達。亞細胞定位分析表明ZNF328蛋白定位在細胞核中。用Gal-4DNA結合系統(tǒng)對ZNF328進行轉錄分析，說明該基因是個轉錄抑制因子，結構域

3、分段分析表明KRAB框起主要的抑制作用。在COS-7細胞中過表達ZNF328抑制了SRE和AP-1的轉錄活性，而這兩種因子是MAPK信號途徑介導的重要因子，說明ZNF328蛋白可能在MAPK信號途徑中作為抑制因子介導細胞功能。為了觀察新基因過表達后細胞蛋白質(zhì)表達的改變，構建了pCMV-Tag2B-ZNF328真核表達載體，應用脂質(zhì)體轉染技術，將ZNF328基因?qū)際eLa細胞系中，通過G418篩選，并經(jīng)PT-PCR鑒定，鑒定了穩(wěn)定表達的

4、細胞系。提取穩(wěn)定轉染細胞的總蛋白，采用雙向凝膠電泳分離細胞蛋白質(zhì)，軟件分析統(tǒng)計ZNF328穩(wěn)定轉染細胞二維圖譜的蛋白質(zhì)點，并與轉染空載體的細胞蛋白質(zhì)點比較，結果表明該基因的穩(wěn)定表達可導致Hela細胞的蛋白質(zhì)表達譜的改變。綜合該基因的結構和表達特征，本文初步得出結論認為：ZNF328基因是參與多種人類胚胎器官發(fā)生的鋅指轉錄調(diào)控因子?！　”疚倪€研究了另外一個人類鋅指蛋白家族新成員ZNF382的功能，將其開放閱讀框克隆至pRSETC及pEG