抗HBV脂質前藥自組裝體的研究.pdf

1、乙型肝炎病毒（HBV）是全球范圍內慢性肝炎肝硬化和肝癌的首要成因。核苷類藥物通過抑制病毒DNA 聚合酶的作用,終止DNA 鏈的延長和合成,從而達到抑制病毒復制的作用。乙型肝炎等疾病之所以缺乏有效的治療藥物,除治療藥物本身的藥理作用尚不夠理想外，其主要原因是肝靶向性差。前體藥物可提高藥物肝靶向性、增強治療效果、降低毒副作用。HepDirect 前藥是一類新的磷酸酯和膦酸酯前藥，可以特異性地被肝細胞CYP450 同工酶CYP3A4 酶氧化,

2、釋放活性形式的核苷酸或核苷膦酸。該類藥物具有明顯的肝靶向性且未發(fā)現(xiàn)與副產物相關的毒性。若將其與新型的藥物傳遞系統(tǒng)聯(lián)系起來會有更好的效果。
　　 自組裝藥物傳遞系統(tǒng)(self-assembled drug deliverysystems，SADDS)是指具有一定表面活性的兩親性藥物或前藥在水溶液中自組裝形成膠束、囊泡或立方相等高度分散的聚集體。SADDS相對于其它微粒分散體系在體內更穩(wěn)定。藥物經脂質衍生化后如滿足一定分子構型特點，

3、就可在水中自組裝成SADDS。這類SADDS既有脂質前藥的性質，如生物膜滲透性增強，又由于高度分散性在體內有巨噬細胞靶向性等特點。
　　 本文的設計思想是將磷酸酯前藥與自組裝藥物傳遞系統(tǒng)相結合，再賦予其肝靶向長循環(huán)作用，可以集合他們的優(yōu)勢，更好的發(fā)揮藥物抗病毒作用，同時又能極大的降低藥物毒副作用。
　　 本文以嘌呤類核苷類似物阿德福韋（PMEA）為模型藥物，經過酯化環(huán)合后得到磷酸酯前藥(APE)，再經過親酯衍生化后得到抗

4、HBV兩親性脂質前藥：月桂酰阿德福韋磷酸酯前藥（LAPE），加入具有肝靶向長循環(huán)作用的半乳糖苷制備成自組裝體，并考察其體內外行為的一般規(guī)律。具體研究內容包括：
　　 1.抗HBV 脂質前藥的合成及性質設計并合成了抗HBV 脂質前藥：正辛酰阿德福韋磷酸酯前藥，正癸酰阿德福韋磷酸酯前藥，十二酰阿德福韋磷酸酯前藥，十四酰阿德福韋磷酸酯前藥，十六酰阿德福韋磷酸酯前藥，十八酰阿德福韋磷酸酯前藥，并對其結構進行確證?？疾炝饲八幍腖angmu

5、ir單分子膜的性質。磷酸酯前藥用脂肪長鏈衍生化后親脂性大大增強，氫鍵和疏水相互作用是決定LAPE 溶解性和能否形成自組裝體的關鍵因素；前藥LAPE分子的成膜性較好，具有形成自組裝體的兩親性。
　　 2.半乳糖苷的合成及性質設計并合成了長循環(huán)肝靶向材料：二十聚乙二醇十六烷基醚半乳糖苷G20DE，并經行了結構鑒定。PEG 鏈使其具有長循環(huán)作用，半乳糖能夠發(fā)揮肝靶向的作用。將其與抗HBV 脂質前藥混合制備自組裝體，能夠得到形態(tài)較好、相

6、對穩(wěn)定的制劑，使其發(fā)揮長循環(huán)肝靶向的作用。
　　 3.抗HBV 脂質前藥自組裝體的制備及結構特點用甲醇（MeOH）將前藥與G20DE 溶解，采用注入法制備得到了高度分散、均勻穩(wěn)定的LAPE 自組裝體。透射電子顯微鏡和激光粒度分析儀觀察其形態(tài)、粒徑和Zeta 電位，結果表明自組裝體為類球形囊泡，平均粒徑為68nm，Zeta 電位-20.4mV。分析LAPE 自組裝體形成的機理為：LAPE分子在十二碳鏈基團的疏水相互作用和核苷基團的

7、氫鍵作用下自發(fā)排列成雙分子層結構，在機械力的作用下彎曲形成類球形囊泡。G20DE的脂肪鏈部分插入到囊泡結構中形成新的自組裝體。
　　 4.抗HBV 脂質前藥自組裝體的物理穩(wěn)定性考察高溫、高壓、離心沉降、室溫長期放置等對LAPE 自組裝體穩(wěn)定性的影響。結果顯示高溫、高壓對自組裝體的粒徑幾乎無影響，前藥含量幾乎不變；高速離心（≤10000rpm）后自組裝體粒徑無變化，粒子不易聚集，重分散性好。LAPE 自組裝體室溫放置能長期保持穩(wěn)定

8、。
　　 5.抗HBV 脂質前藥自組裝體的化學穩(wěn)定性以HPLC為含量測定方法，考察了LAPE 自組裝體在不同pH緩沖液、不同動物血漿及小鼠組織勻漿中的降解情況。結果表明：LAPE 在pH2.0 緩沖液中很快降解，t1/2為24.8h；pH5.5 環(huán)境下相對穩(wěn)定，t1/2 為277h；在pH7.4 環(huán)境中能長時間保持穩(wěn)定，t1/2>630h。而LAPE 自組裝體在不同種屬動物血漿中的降解速率有所差別，其中在小鼠和大鼠血漿中降解較快

9、，在人和犬血漿中降解緩慢。LAPE 自組裝體在小鼠肝組織勻漿中降解最快，t1/2小于1h。在小鼠脾組織勻漿中降解較快，而在腎中降解最慢。
　　 6.抗HBV 脂質前藥自組裝體的初步藥效學通過對HBV 轉染小鼠灌胃給藥來考察LAPE 自組裝體的抗病毒效果。結果表明LAPE 自組裝體具有較好的抗HBV 作用，LAPE能夠在體內降解為原藥阿德福韋磷酸酯前藥抑制病毒的復制，發(fā)揮藥理作用。7.自組裝體在動物體內的藥物動力學和組織分布LAP

10、E 自組裝體經小鼠靜脈注射后迅速從血液向各主要組織（心，肝，脾，肺，腎）
　　 分布，在肝組織的分布是腎的三到五倍,具有明顯肝靶向性。靜脈注射后在小鼠血漿的分布相t1/2 為1.87min；消除相t1/2 為136.8min，說明LAPE 自組裝體具有一定的長循環(huán)作用。長循環(huán)肝靶向作用使LAPE 自組裝體能更好的發(fā)揮藥理作用并減小毒副作用。
　　 本文設計、篩選并制備得到了高度分散、均勻、穩(wěn)定的LAPE 自組裝體，證明了