AngⅡ、Ang1-7對THP-1巨噬細胞PPARγ、LXRα表達的影響及其相互作用.pdf

1、研究目的：在動脈粥樣硬化形成的過程中，膽固醇的沉積和泡沫細胞的形成是一個關鍵的環(huán)節(jié)，過多的膽固醇可以促使巨噬細胞轉化為泡沫細胞，ATP 結合盒轉運子A1(ATP-bindingcassette transporter A1，ABCA1)是一個抗AS基因，它能促進細胞中膽固醇的流出，并抑制泡沫細胞的形成。過氧化物酶體增殖物激活受體（Peroxisome proliferators-activatedreceptors，PPARs)是一種調

2、控脂質和糖類代謝的核受體，包括PPARα,PPARβ(σ)和PPARγ三種亞型，LXRs 也是核受體超家族的一員，在調節(jié)脂質代謝的過程中起著關鍵的作用。
　　 膽固醇濃度的升高會激活LXRs，進而誘導一系列參與膽固醇吸收、流出和轉運的基因發(fā)生表達。大量研究表明，PPARγ、LXRa、ABCA1在膽固醇外流過程中呈轉錄級聯效應，本實驗通過研究AngII、Ang(1-7)對膽固醇外流中PPARγLXRa的影響，探討二者在動脈粥樣硬化

3、中的作用。觀察Ang(1-7)對AngII的拮抗作用是否由其特異性受體MAS 介導的，觀察Ang(1-7)、ARB對AngII作用的影響。
　　 研究方法：人單核細胞用100nmol/L 佛波酯誘導48小時，使其轉化為巨噬細胞。換用無血清培養(yǎng)液培養(yǎng)后，分組并加入不同的處理因素，分組情況為：（1）空白對照組；（2）AngII(3)Ang-(1-7) (4)AngII+Ang-(1-7)(5)AngII+ARB(6)AngII+An

4、g-(1-7)+A-779。AngII 有四個不同的濃度：100nmoL/L, 1000nmoL/L, 5000nmoL/L, 10000nmoL/L, Ang-(1-7)有三個不同濃度：100nmoL/L, 1000nmoL/L,10000nmoL/L，氯沙坦分三個不同的濃度：10umoL/L,50umoL/L,100umoL/L。培養(yǎng)48小時，收集各組細胞，提取RNA和蛋白，用RT-PCR的方法檢測PPARr、LXRamRNA的表達

5、，用western-blot方法檢測PPARγ、LXRa蛋白的表達，對數據進行統(tǒng)計學分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結果果：1、Ang(1-7)可以呈濃度依賴性促進PPARγmRNA及蛋白的表達；
　　 2、AngⅡ可以呈濃度依賴性抑制PPARγmRNA及蛋白的表達；
　　 3、AngII對PPARγ、LXRα的作用可以被其特異性受體阻滯劑氯沙坦阻斷，這一阻斷作用呈濃度依賴性增強；
　　

6、4、AngII對PPARγ、LXRα的作用可以被Ang-(l-7)拮抗，這一拮抗作用隨Ang-(l-7)濃度的升高而增強；
　　 5、Ang-(l-7)對AngII的作用可以被其特異性受體阻滯劑A-779 阻斷。差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　 結論論：在THP-1巨噬細胞，Ang(1-7)可以呈濃度依賴性促進PPARγ、LXRα表達，AngⅡ可以呈濃度依賴性抑制PPARγ、LXRα表達。在影響二者表達的過程中