燒干蟾水提物對人結(jié)腸癌細(xì)胞系SW480抑制與凋亡的初步研究.pdf

1、目的：觀察燒干蟾水提物（ water soluble extract components of roast Toad， WSECRT）對人結(jié)腸癌細(xì)胞株SW480細(xì)胞增殖及凋亡情況的影響；檢測燒干蟾水提物對SW480細(xì)胞細(xì)胞周期的影響，并對其誘導(dǎo)凋亡的相關(guān)作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　方法：設(shè)置陰性對照組、華蟾素陽性對照組與WSECRT實(shí)驗(yàn)組，以不同濃度的藥物作用于結(jié)腸癌細(xì)胞株SW480，應(yīng)用倒置顯微鏡觀察藥物對SW480細(xì)胞形態(tài)學(xué)

2、的影響；應(yīng)用噻唑藍(lán)還原法（MTT）檢測藥物對結(jié)腸癌細(xì)胞株SW480細(xì)胞增殖的抑制作用；應(yīng)用Hoechst33342熒光染料檢測藥物對SW480細(xì)胞干預(yù)后的凋亡情況；應(yīng)用AnnexinV/PI雙染色法檢測WSECRT干預(yù)SW480后細(xì)胞凋亡及壞死的情況；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析 SW480細(xì)胞經(jīng)WSECRT作用后其周期分布情況的變化。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：所有數(shù)據(jù)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤（mean±S.M.E）表示。采

3、用t檢驗(yàn)及單因素方差分析（Fisher's LSD test）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所有統(tǒng)計(jì)分析P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：（1）經(jīng) WSECRT與華蟾素處理后，SW480細(xì)胞在10×20倍光鏡下的形態(tài)學(xué)觀察可見細(xì)胞數(shù)目減少，形態(tài)變圓，出現(xiàn)偽足，細(xì)胞內(nèi)空泡和顆粒增多，出現(xiàn)大量細(xì)胞碎片。（2）WSECRT與華蟾素可顯著抑制SW480細(xì)胞增殖分裂，相應(yīng)濃度下WSECRT的抑制作用較華蟾素更為明顯。WSECRT0.01、0.

4、05、0.25、1.25、6.25mg/ml作用24h、48h、72h的半數(shù)抑制濃度（IC50）分別為4.194mg/ml、3.064mg/ml與1.710mg/ml，華蟾素0.001、0.005、0.025、0.125、0.625μg/ml作用24h、48h、72h后的IC50（以5-HT計(jì)）分別為0.971μg/ml、0.339μg/ml、0.253μg/ml。（3）Hoechst33342染色結(jié)果顯示W(wǎng)SECRT處理的SW480細(xì)

5、胞核藍(lán)染顏色明顯加深，出現(xiàn)染色質(zhì)凝聚和凋亡小體。（4）流式細(xì)胞儀檢測顯示，細(xì)胞凋亡與WSECRT呈濃度和時(shí)間依賴關(guān)系，隨著濃度的增加及時(shí)間的延長細(xì)胞凋亡比例明顯增加，與陰性對照差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（*P<0.01）。（5）流式細(xì)胞儀檢測顯示細(xì)胞周期發(fā)生明顯改變，細(xì)胞分裂阻滯在S期，與陰性對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（*P<0.01）。
　　結(jié)論：
　?。?）WSECRT與華蟾素都可抑制SW480細(xì)胞增殖，其抑制程度與時(shí)間、劑量呈依