睪丸酮叢毛單胞菌TetR對甾體類化合物水解酶3,17β-HSD和3α-HSD表達的調節(jié).pdf_第1頁
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文檔簡介

1、 分類號： 密 級： 公開 U D C： 編 號： 睪丸酮叢毛單胞菌 TetR 對甾體類化合物水解酶3,17β-HSD 和 3α-HSD 表達的調節(jié) Identification of a repressor TetR for 3,17β-HSD and 3α-HSD

2、 expressional regulation in Comamonas testosteroni 學位授予單位及代碼：長春理工大學 （10186） 工程領域名稱及代碼：化學 （0703） 研 究 方 向：生物化學分析 申請學位級別： 碩士 指 導 教 師：何秀霞 副教授 研 究 生： 陳羚

3、 論文起止時間：2014.09—2016.12 摘 要 環(huán)境中過多甾體激素而產生的健康問題，備受人們關注，睪丸酮叢毛單胞桿菌分泌的 3α-HSD 和 3,17β-HSD 是分解類固醇類反應中重要的兩種功能酶。通過研究一些調節(jié)因子對 3α-HSD 和 3,17β-HSD 表達的調節(jié)，給甾體激素降解提供更多的理論依據。本文將 TetR 基因通過 PCR 技術從睪丸酮叢毛單胞桿菌全序列擴增出來。 為了證明該基因的功能，將 Te

4、tR 克隆進 pET-15b、pUC19、pK18 這幾種不同的表達載體并分別與帶有 3α-HSD 和 3,17β-HSD 調控序列的質粒共轉化， 并用不同甾體激素誘導分析 TetR 的表達調控作用。 通過熒光檢測和 ELISA 檢測，發(fā)現在有 TetR 表達的共轉化菌中，3α-HSD 蛋白的表達量比沒有轉入 TetR 基因的細菌相比明顯降低 （在 TetR 作用下 3α-HSD 蛋白的表達含量降低了 32.72％）。同樣在有 TetR

5、 表達的共轉化菌中 3,17β-HSD 蛋白的表達量比沒有轉入 TetR 基因的細菌相比明顯降低（蛋白表達量下降 26.20％）。表明 TetR 是3α-HSD 和 3,17β-HSD 的抑制子，TetR 對 3,17β-HSD 的阻遏區(qū)域在 P2 處。且睪丸酮可以解除 TetR 蛋白對 3α-HSD 蛋白和 3,17β-HSD 蛋白表達的抑制作用。 進一步制備 TetR多克隆抗體，通過 ELISA 驗證 TetR 蛋白表達不受甾體激素

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