大鼠P2X4受體側窗區(qū)氨基酸殘基對受體功能的作用.pdf

1、胞外ATP(Adenosine Triphosphate)激動的P2X受體蛋白家族是配體門控離子通道，能非選擇性地通透多種陽離子。ATP與P2X受體蛋白結合后激活P2X受體蛋白并使該通道發(fā)生由關閉狀態(tài)到開放狀態(tài)的構象轉變。已有的晶體結構研究表明P2X受體蛋白上的ATP結合位點與其跨膜區(qū)孔道是由結構上相對保守的三個連接區(qū)連接的，而這些連接區(qū)又構成了允許離子進入離子通道孔道的側窗區(qū)。連接區(qū)傳遞由ATP結合后引起的直至跨膜區(qū)孔道一系列構象變化

2、信息的作用還不是十分清楚。
　　本實驗中我們利用P2X4受體作為研究對象，采用丙氨酸、絲氨酸定點突變的方法研究連接區(qū)氨基酸殘基的側鏈結構對離子通道門控作用的影響。實驗表明Y54A/S，F(xiàn)198A/S，和W259A/S這些突變受體轉染后均能在HEK293細胞上正常表達，但是這些突變受體在ATP刺激下幾乎不能應答。其中F198A/S突變受體的功能能被P2X4離子通道特別的陽性調節(jié)劑伊維菌素(IVM)部分恢復。Y195A/S，F(xiàn)200A

3、/S和F330A/S這些突變受體都顯示了與P2X4野生型受體相似的正常功能，說明這三個氨基酸殘基均沒有影響ATP的激動能力。然而Y195A/S，F(xiàn)200A/S和F330A/S這些突變受體均明顯地改變了對IVM調節(jié)受體失活時間效應的敏感度，說明這三個氨基酸殘基可能參與了受體離子通道門控作用的調節(jié)?？傊?，我們的研究數(shù)據顯示離子通道胞外區(qū)與跨膜區(qū)之間的連接區(qū)保守的氨基酸殘基參與了P2X受體構象轉變過程中的信號轉導過程與離子通道門控作用。