結(jié)核患者CD4+T淋巴細胞ESAT-6與CFP-10蛋白刺激前后基因表達譜分析研究.pdf

1、背景：
　　結(jié)核分枝桿菌（MTB）作為結(jié)核病的病原菌，一直以來危害著人類的健康。具WHO最新統(tǒng)計，目前全球每年新增活動性結(jié)核病患病人數(shù)約為1040萬，年死亡人數(shù)約為140萬，全球有超過1/3的人口感染過結(jié)核分枝桿菌，同時隨著合并HIV感染和多重耐藥病例的增多，結(jié)核病的防治形勢十分嚴峻。尋找快速、準確、靈敏、特異的試驗方法，對于結(jié)核病的防治有著十分重大的意義。IGRA是近些年發(fā)展起來的結(jié)核病診斷方法，有大量的文獻報道，該方法對于結(jié)核

2、病的診斷特異而靈敏。IGRA中運用了結(jié)核分枝桿菌兩種特異性蛋白ESAT-6和CFP-10作為診斷性抗原，檢測靶細胞釋放IFN-γ的量，從而判斷受檢者的感染情況。其中釋放IFN-γ主要是CD4+T淋巴細胞，然而，目前對于ESAT-6和CFP-10的刺激后CD4+T淋巴細胞釋放IFN-γ的作用機制和其中的具體差異表達基因研究較少。
　　目的：
　　利用全基因組表達譜芯片篩選ESAT-6和CFP-10刺激結(jié)核患者外周血CD4+T淋

3、巴細胞前后差異表達基因，并分析刺激過程中可能參與的信號通路的變化，為進一步研究結(jié)核病的發(fā)病機制提供依據(jù)。
　　方法：
　　抽取3例初診結(jié)核患者外周靜脈血各10 ml，密度梯度離心法分離獲得PBMC，分別以ESAT-6和CFP-10刺激PBMC，6 h后運用磁珠分選法分選CD4+ T淋巴細胞，運用基因表達譜芯片篩選刺激前后差異表達基因，并進行生物信息學分析，同時使用q-RT PCR驗證部分差異表達基因。
　　結(jié)果：

4、>　　1.ESAT-6刺激前后基因表達譜芯片共篩選出2297個差異表達基因，其中上調(diào)基因1071條，下調(diào)基因1226條（>2倍變化且P<0.05）。信號通路分析顯示這些差異表達的基因參與了17條信號通路的調(diào)控，其中JAK-STAT信號通路，Toll樣受體信號通路，NF-κB信號通路，MAPK信號通路，PI3K-AKT信號通路等5條信號通路與結(jié)核釋放IFN-γ關(guān)系密切。
　　2.CFP-10刺激前后基因表達譜芯片共篩選出2954個差

5、異表達基因，其中上調(diào)基因1360條，下調(diào)基因1594條（>2倍變化且P<0.05）。信號通路分析顯示這些差異表達的基因參與了21條信號通路的調(diào)控，其中JAK-STAT信號通路，Toll樣受體信號通路，T細胞受體信號通路，MAPK信號通路，TGF-β信號通路等5條信號通路與結(jié)核釋放IFN-γ關(guān)系密切。
　　3.q-RT PCR實驗證實7種差異基因表達趨勢與芯片結(jié)果一致。
　　結(jié)論：
　　ESAT-6和CFP-10刺激后的