人肺癌細胞系NCI-H1650中干細胞的分離及鑒定.pdf

1、背景：
　　肺癌發(fā)病率高，惡性程度高，預后差，死亡率高，占腫瘤相關死亡的首位。CSCs是一群異質性細胞，能自我更新并有無限增殖和多向分化潛能。肺癌干細胞與肺癌的發(fā)生發(fā)展，維持，侵襲轉移，復發(fā)，耐藥等密切相關。因此，對肺癌干細胞的研究可為肺癌提供更多的治療方向。然而肺癌中肺癌干細胞含量極少，有效分離得到肺癌干細胞是進行肺癌干細胞研究的重要基礎。我們將采用兩種不同的方式來分離人肺癌細胞系NCI-H1650中的干細胞。
　　目的：

2、
　　分離出入肺癌細胞系NCI-H1650中的干細胞并進行鑒定。
　　方法：
　　1.應用無血清培養(yǎng)聯合紫杉醇刺激的方法誘導NCI-H1650干細胞。
　　2.流式細胞術和免疫熒光檢測誘導細胞表面CD133和CD326表達;采用RT-PCR和Western blot檢測干性基因Oct-4、Nanog、Sox-2。
　　3.應用免疫磁珠分選法分選NCI-H1650干細胞。
　　4.免疫熒光檢測磁珠分選細

3、胞表面CD133和CD326表達;采用RT-PCR和Western blot檢測干性基因Oct-4、Nanog、Sox-2。
　　結果：
　　1.誘導NCI-H1650干細胞在SFM中呈球形生長。
　　2.誘導NCI-H1650干細胞表達干細胞表面標志CD133和CD326。
　　3.誘導NCI-H1650干細胞表達干性基因Oct-4、Nanog、Sox-2。
　　4.磁珠分選細胞在SFM中呈球形生長。

4、r>　　5.磁珠分選細胞表達干細胞表面標志CJ133和CD326。
　　6.磁珠分選細胞表達干性基因Oct-4、Nanog、Sox-2。
　　結論：
　　1.無血清培養(yǎng)聯合紫杉醇刺激能有效誘導NCI-H1650干細胞，并高表達CSCs表面標志CD133和CD326，高表達CSCs相關基因Oct-4、Nanog和Sox-2。
　　2.免疫磁珠分選法能有效分選出NCI-H1650干細胞，并高表達CSCs表面標志CD1