苧麻莖皮差減文庫的構建及纖維發(fā)育相關基因的篩選.pdf

1、苧麻(Boehmeria nivea(L.) Gaud)，為蕁麻科苧麻屬多年生韌皮纖維作物。苧麻是最長的纖維作物之一，素有“天然纖維之王”的美譽。苧麻莖皮是由韌皮纖維細胞構成的，是纖維的主要來源。本研究利用組織生長的階段性，利用苧麻莖皮地上莖的不同部位，以莖頂端為Tester，莖基部為Driver進行差減雜交，構建了兩個苧麻莖皮差減文庫P和U。得到以下結果：
　　 1.PCR產物進行純化的差減文庫P挑取保存了1102個陽性克隆，

2、獲得了13個陽性克隆的測序結果，并進行了BlastX和BlastN比對分析；PCR產物未經過純化的差減文庫U挑取保存了1152個陽性克隆，獲得了185個陽性克隆的測序結果，并進行了Blast分析和生物信息學分析。
　　 2.庫U中的EST序列除去小片段和載體序列后獲得171條有效序列，分為14類功能基因：能量相關的序列數量最多，有52條，占30％;未分類序列有39條，占23％;蛋白質合成、細胞結構相關序列各有14條，各占8％;未

3、明確分類序列有13條，約占8％;代謝相關序列10條，占6％;蛋白質降解及貯藏相關序列有8條，占5％;轉錄、抗病及防御相關序列各有4條，各占2％;細胞生長及分化、胞內運輸、次生代謝相關序列各有3條，各占2％;轉運、信號轉導各有2條，各占1％。
　　 3.庫U中的EST序列除去低質量序列和載體序列后獲得166條有效序列，拼接后得到37條unisecquences，包括19個contig和18個singlet。并從分子功能、細胞組成和

4、生物學過程三個方面對其分類和分析：
　　 在分子功能水平2上，與結合功能相關的序列有67％;與催化活性相關的序列有45％;與抗氧化活性相關的序列有18％;與分子結構活性相關的序列有8％;與翻譯調節(jié)活性相關的序列有2％;與轉運活性相關的序列有2％。
　　 在細胞組成水平2上，與組成細胞和部分細胞相關的序列有43％;與組成細胞器相關的序列有37％;與組成大分子復合體相關的序列有32％;與組成部分細胞器相關的序列有8％;與組成

5、胞外結構相關的序列有2％。
　　 在生物學過程水平2上，與代謝過程相關的序列有62％;與細胞生理過程相關的序列有54％;與應激反應過程相關的序列有21％;與生物調控相關的序列有5％;與發(fā)育過程相關的序列有5％;與建立定位過程相關的序列有5％;與定位過程相關的序列有5％;與多細胞有機體過程相關的序列有2％;與生物過程的正調控與負調控相關序列分別有2％。
　　 4.Blast篩選出9條與纖維發(fā)育相關基因，它們分別是α-微管蛋