絲瓜絡多糖對3T3-L1前脂肪細胞分化的影響.pdf

1、目的:
　　本研究通過對絲瓜絡（Retinervus luffae fructus，RLF）多糖的提取條件進行優(yōu)化，并對絲瓜絡多糖（Retinervus luffae fructus polysaccharide，RLFP）進一步分離和純化。觀察RLF P對3 T3-L1前脂肪細胞分化的影響，并探討其作用機制。
　　方法:
　?。?）采用單因素法和正交實驗設計，確定RLFP的熱水浸提的最佳工藝參數(shù)。
　　（2）多

2、糖純化過程中，采用活性炭脫色，比較Sevag法、三氯乙酸法（TCA法）和酶法脫蛋白方法。
　　（3）DEAE-cellulose柱層析法對絲瓜絡多糖進一步分離純化，通過紫外光譜和紅外光譜對得到的組份進行初步理化性質的分析。
　?。?）MTT法觀察不同濃度的絲瓜絡多糖對3 T3-L1前脂肪細胞活性的影響。
　?。?）油紅O染色法檢測絲瓜絡多糖對3T3-L1前脂肪細胞分化的影響。
　?。?） RT-PCR法檢測絲瓜絡

3、多糖對3 T3-L1前脂肪細胞分化第8天脂肪分化轉錄因子C/EBPβ、PPARγ、C/EBPαmRNA的表達水平。
　　（7）Western blot檢測絲瓜絡多糖對3T3-L1前脂肪細胞分化第8天脂肪分化轉錄因子C/EBPβ、PPARγ、C/EBPα蛋白的表達水平。
　　結果:
　　（1）通過對熱水浸提過程中影響多糖提取率的因素進行單因素和正交試驗分析，獲得最佳提取工藝條件為：以1:40的料液比，90℃條件下提取時間

4、6 h，提取1次。
　　（2）在絲瓜絡多糖的純化過程中，根據(jù)比較三種純化方法的多糖損失率和蛋白去除率，結果表明，Sevag法、TCA法和酶法的多糖損失率分別為29.3％、46.8%、18.7%，蛋白的去除率分別為78.9%、89.4%、72.8%。
　?。?）通過DEAE-cellulose柱層析，獲得兩個多糖組份，分別為絲瓜絡提取物Ⅰ（RLFⅠ）和絲瓜絡提取物Ⅱ（RLFⅡ），紅外光譜分析RLFⅠ含β-D吡喃葡萄糖。RLFⅡ

5、含吡喃環(huán)和呋喃環(huán)。
　　（4）MTT結果表明。RLFⅠ使3 T3-L1前脂肪細胞的活力下降。RLFⅡ對3 T3-L1前脂肪細胞的活力影響不明顯。
　　（5）油紅O染色顯示，RLFⅠ減少脂肪細胞甘油三酯的聚集（P<0.05）；RLFⅡ則無顯著效應。
　　（6）RT-PCR結果顯示，與對照組相比，RLFⅠ處理組3T3-L1前脂肪細胞C/EBPβ、PPARγ和C/EBPαmRNA和蛋白的表達水平明顯降低（P<0.05）。