WAS蛋白缺陷對記憶B細胞和濾泡輔助T細胞功能的影響和機制研究.pdf

1、本文分析了WAS蛋白缺陷對記憶B細胞和濾泡輔助T細胞功能的影響。本研究分為兩個部分：
　　第一部分：WAS蛋白缺陷對生發(fā)中心B細胞和記憶B細胞功能的影響及機制研究。
　　目的：免疫記憶是機體適應性免疫應答的核心。免疫記憶的缺失或失調可引起多種免疫性疾病。免疫系統(tǒng)單基因遺傳病稱為原發(fā)性免疫缺陷?。≒ID），PID對研究人類免疫系統(tǒng)運行規(guī)律意義重大。WAS綜合征是一種罕見的X-連鎖隱性遺傳PID，WAS突變導致WAS患者產生特異

2、性抗體功能缺陷。本研究以 WAS患者和 WASKO小鼠為模型，討論 WASP影響 MBCs形成及其維持，免疫記憶應答，GCB和MBCs活化及分化的分子機制。
　　方法：我們通過流式細胞術檢測 WAS患者或健康對照外周血B細胞各亞群的百分比和數量。T細胞依賴性抗原免疫后WASKO和 WT小鼠脾臟中B細胞各亞群的百分比和數量。并檢測GCB及MBC的增殖和凋亡。我們使用 WASKO/WT骨髓嵌合體小鼠模型以驗證WASp缺陷時特異性免疫缺

3、陷是否固有存在。
　　結果：WAS患兒血漿中分泌抗原特異性免疫球蛋白的量明顯較同齡健康兒童減少。WASKO小鼠抗原特異性GCB細胞、漿母細胞及記憶B細胞數量較WT小鼠明顯減少，抗原特異性漿細胞占漿細胞比例較WT小鼠也明顯下降；WASKO小鼠GCB細胞及記憶B細胞增殖功能受損。
　　結論：WASp作為肌動蛋白骨架蛋白調節(jié)因子參與GCB和MBCs的生成和分化，WASp缺陷時 T細胞依賴性免疫反應尤其是GCB向MBC轉化途徑存在缺

4、陷。
　　第二部分：WAS蛋白缺陷對濾泡輔助 T細胞功能的影響和機制研究。
　　目的：WAS是血液系統(tǒng)的特異性調節(jié)肌動蛋白，WAS病人以濕疹、血小板減少伴免疫缺陷為主要特征。本研究以WAS患者及WASKO小鼠為模型，以明確WASp缺陷對濾泡輔助T細胞（Follicular helper T-cell, Tfh）細胞數量及功能的影響，并明確缺陷Tfh細胞對免疫記憶功能的影響。
　　方法：通過流式細胞數檢測 WAS患者或健

5、康對照外周血及WASKO和 WT小鼠脾臟中 Tfh細胞的頻率和數量。我們使用WASKO/WT骨髓嵌合體小鼠模型以驗證WASp缺陷時Tfh缺陷是否固有存在。我們把WASKO或 WT小鼠的初始CD4 T細胞分別過繼性移植給 CD4KO小鼠，同時在體外把 WAS患者和健康對照者及WASKO及WT小鼠的Tfh細胞和初始B細胞共培養(yǎng)，ELISA檢測細胞培養(yǎng)液中IgG分泌情況，以驗證缺陷Tfh對免疫記憶功能的影響。
　　結果：WAS患者外周血

6、Tfh細胞增殖降低，凋亡增加，其頻率和數量相較于健康對照明顯減少。WAS患者Tfh細胞中ICOS的表達增加，BCL6表達減少。這一結果在 WASKO小鼠中得到復制。但在骨髓嵌合體小鼠中，WASKO組骨髓嵌合小鼠相較于 WT組小鼠表現出Tfh細胞及BCL6表達明顯降低，但是ICOS表達也降低。體內Tfh功能試驗所得WASKO組移植小鼠體內T細胞依賴性記憶B細胞及生發(fā)中心B細胞生成明顯降低。體外Tfh功能實驗WAS組細胞培養(yǎng)液分泌IgG明顯