九龍江流域耐藥細(xì)菌及其特定耐藥基因和整合子的研究.pdf

1、囊萎夫?qū)W碩士學(xué)位論文九龍江流域耐藥細(xì)菌及其特定耐藥基因和整合子的研究S t u d i e s o n A n t i b i o t i c ．r e s i s t a n tB a c t e r i aI s o l a t e df r o m J i u l o n gR i v e r a n d T h e i r C a r r y i n gR e s i s t a n t G e n e s a n d I n

2、t e g r o n s論文答辯日期： 2 Q 里§生魚(yú)旦里三日九龍江流域耐藥細(xì)菌及其特定耐藥基因和整合子的研究摘 要自發(fā)現(xiàn)并開(kāi)始使用抗生素后，細(xì)菌耐藥性就已經(jīng)產(chǎn)生并且隨著抗生素的廣泛使用而日益嚴(yán)重，嚴(yán)重威脅著人類(lèi)和動(dòng)物的健康，如今細(xì)菌耐藥性問(wèn)題己成為全球性研究熱點(diǎn)。本研究從九龍江流域選取2 1 個(gè)站點(diǎn)采集表面水體樣品，通過(guò)抗生素篩選平板篩選出1 9 1 株無(wú)重復(fù)耐藥細(xì)菌。利用1 6 Sr D N A 分子鑒定以及0 T U

3、 聚類(lèi)分析和系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)確定1 9 1株耐藥細(xì)菌屬于2 0 個(gè)菌屬，以不動(dòng)桿菌屬( 2 5 ．7 ％) 、氣單胞菌屬( 1 6 ．2 ％) 、叢毛單胞菌屬( 1 4 ．7 ％) 和假單胞菌屬( 1 2 ．0 ％) 等菌屬為主。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示該1 9 1 株耐藥細(xì)菌對(duì)八大類(lèi)1 9 種抗生素的耐藥率為8 ．9 ％．9 9 ．5 ％；所有菌株都對(duì)3 種或以上抗生素有抗性；總體上看1 9 1 株耐藥細(xì)菌對(duì)八大類(lèi)抗生素的耐藥程度為B ．內(nèi)酰胺類(lèi)&

4、gt; 利福霉素類(lèi)> 磺胺類(lèi)> 氯霉素類(lèi)> 大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)> 四環(huán)素類(lèi)> 氨基糖苷類(lèi)> 喹諾酮類(lèi)。采用P C R 法檢測(cè)1 9 1 株耐藥細(xì)菌中與上述八大類(lèi)抗生素耐藥性相關(guān)的2 3 種抗性基因的存在情況。結(jié)果顯示1 9 1 株耐藥細(xì)菌中b l a r E M 基因( 8 9 ．0 ％) 的檢出率最高，其次是a r r 2 ／3基因( 6 6 ．5 ％) ，再者是q n r S 基因( 5 5 ．0 ％)

5、；全部菌株都攜帶至少1 種耐藥基因；總體上看，1 9 1 株耐藥細(xì)菌中八大類(lèi)耐藥基因的陽(yáng)性率順序?yàn)锽 ．內(nèi)酰胺類(lèi)> 利福霉素類(lèi)> 喹諾酮類(lèi)> 磺胺及甲氧芐啶類(lèi)> 氨基糖苷類(lèi)> 四環(huán)素類(lèi)> 氯霉素類(lèi)> 大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)，與耐藥表型比較并非完全對(duì)應(yīng)，猜測(cè)是由于細(xì)菌有更多的耐藥基因和耐藥機(jī)制以及某些耐藥基因表達(dá)水平低下或表達(dá)失敗等原因所導(dǎo)致。此外，1 9 1 株耐藥細(xì)菌均檢測(cè)出1 型整合酶基因，5 株檢測(cè)出

6、2 型整合酶基因，無(wú)菌株檢測(cè)到3 型整合酶基因。1 9 1 株l 型整合酶基因陽(yáng)性菌株中有7 0 株成功擴(kuò)增出可變區(qū)，基因盒排列共有3 1 種，以d f r A l 2 —0 ，肛a a d A 2 最為普遍，還包括9 種新型基因盒排列：a a d A 5 一o r f D 、q a c H - c m l A l 一a a d A 2 、a a c A 4 一a a d A l 一t n a A ’、a a c A 4 一e r e

7、A l 一b Z 蚴一2 一a a d A l 、d f r A 5 一a a c A 4 一n i t l —n i t 2 一c a t B 3 、d f r A l 7 - a a c A 4 一n i t l —n i t 2 一c a t B 3 、u n k n o w n —a a c A 4 一e r e A l 一b l a o x A 一2 一d f r A l 、d U r A l 6 一b l a p s E -

8、 i —a a d A 2 一c m l A l 一a a d A l 、d U r A l 6 一b l a p s E 4 一a a d A 2 ．c m l A l 一o r f A ’一t r i a l s 47 。而3 1 種排列共涉及3 4 種基因盒，包括2 7 種抗性基因、4 種編碼未知功能的假設(shè)蛋白基因、2 種類(lèi)似轉(zhuǎn)座酶基因和1 種新型基因。其中以a a d A 2 出現(xiàn)的頻率最高，該基因賦予細(xì)菌對(duì)鏈霉素和奇霉素的耐藥