CAV VP1、VP2融合基因在大腸桿菌中的克隆及表達.pdf_第1頁
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1、中國農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文CAVVP1、VP2融合基因在大腸桿菌中的克隆及表達姓名：劉寶山申請學位級別：碩士專業(yè)：預防獸醫(yī)學指導教師：田克恭陳西釗20040601AbstractChickenanaemiavirusisaviruscausingchickenanaemiacomplicatedbyaplasiaofthebonemarrowandatrophyoftbelymphoidorgansinyoungchickensandat

2、ransients辜v氍immunodeficieneyinolderchickensTheVPlproteinofCAVisnotonlyamainstructuralprotein，butalsotheonlyproteininaCAVparticleTheVP2mayplayacertainroleinassistingVPltoassemblethecapsidsofvirusasthecompanionorframeworkp

3、rotein(Scaffoldprotein)ItisreportedthatthechickenimmunizedbythetiactedsectcellsthatCansimultaneouslyexpressvPlandVP2producedtheantibodyagainstCAvbuttheirexpressiondealislowanditdocsn’tfittothedemandofthelargescaleusagein

4、productionfarmifthefusionproteinofVPIandVP2thatwasexpressedinEeoliCallformneutralizingantigenepitopesthisproblemisresolvedIsittrueThisstudyisabasicstudyaboutitbycloningandexpressingofVPlandVP2fusiongenesofchickenanaemiav

5、irusinEcolLinthisstudy，theVPlandVP2geneofCAVweremagnifiedbypolymerasechainreactionusingdesignedprimersandwereclonedandsequencedTheirsequencesofDNAandaminoacidsweTeanalyzedwithcomputersoftwareonmolecularbiologyBasedonthea

6、nalysisresults，threepartitionofVPlgeneofCAVwereclonedandinsertedintothebacterialplasmidspGEX4TITherecombinantplasmidscontainingVPlpartitongeneofCAVWereidentifiedbyrestrictionenzymeanalysisandPCRmethodThenthewholeVP2genew

7、asinsertedintotherecombinantplasmidsThenewrecombinantplasmidscontainingVPlandVP2fusiongeneofCAVwe糟identified。TherecombinantfusionproteinwashighlyexpressedintheformofinclusionbodiesinEcoliBL21inducedbylmmol／LIPTGThemolecu

8、larweightofthefusionproteinis95kD、80kdand66kDWestem—blotanalysiswithgcraagainstCAVshowedthefusionproteinhadgoodspecificityAftertheinclusionbodiesoffusionproteinswerepurifiedwithwashingbufferconsistingof4mol／LUreaforsever

9、altimes，theyWeredissolvedbythedenaturingbuffercontaining1％SDSasdenaturantThenthepurificationofthefusionproteinsbyelectrodialysismethodalsoattainedperfectresultAgoodrenaturationresultwasobtainedusinggradientdialysiswithlo

10、werproteinconcentrationThespecifici移ofthefusionproteinswasidentifiedusingELISAmethodOnefusionproteinnamedFexhibitedspecificbindingtoantibodiesagainstCAVTheresultshowsthatthispurifiedproteinhasexcellentspecificityanditcar

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