基于等溫信號(hào)放大技術(shù)的石英晶體微天平檢測(cè)DNA及蛋白質(zhì).pdf

1、本文采用石英晶體微天平檢測(cè)方法，構(gòu)建了基于滾環(huán)復(fù)制放大技術(shù)、雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、酶切循環(huán)放大等系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)了對(duì)基因及蛋白質(zhì)的高靈敏度、高選擇性檢測(cè)。本研究主要內(nèi)容包括：
　?、爬脻L環(huán)復(fù)制放大技術(shù)與生物催化沉淀技術(shù)相結(jié)合實(shí)現(xiàn)對(duì)DNA及溶菌酶進(jìn)行了高靈敏、高選擇檢測(cè)。利用適體與靶蛋白的特異性結(jié)合作用，將與適體雜交互補(bǔ)的 DNA釋放出來進(jìn)一步與固定在電極表面的發(fā)卡探針結(jié)合，在限制性內(nèi)切酶的作用下，通過特異性識(shí)別位點(diǎn)剪切釋放引發(fā)鏈，同時(shí)將互補(bǔ)D

2、NA釋放出來形成循環(huán)放大，在T4連接酶和DNA聚合酶的作用下發(fā)生滾環(huán)復(fù)制放大反應(yīng)，形成一條具有大量重復(fù)序列的單鏈，利用生物素標(biāo)記信號(hào)探針將親和素標(biāo)記的HRP捕獲到芯片表面，進(jìn)而引發(fā)生物催化沉淀反應(yīng)，增加芯片的質(zhì)量，從而對(duì)DNA及蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)。
　?、苹诤怂嵬馇忻秆h(huán)放大、雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)及納米顆粒增強(qiáng)的 QCM實(shí)現(xiàn)DNA的高靈敏檢測(cè)。構(gòu)建的雜交互補(bǔ)雙鏈DNA探針，能夠與靶DNA的雜交互補(bǔ)后形成平末端結(jié)構(gòu)，在EXO III的作用下，

3、形成酶切循環(huán)放大反應(yīng)進(jìn)而引發(fā)芯片上的生物素標(biāo)記的 DNA發(fā)生雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，使得大量的鏈酶親和素修飾的納米金粒子因生物素與鏈酶親和素特異性結(jié)合被捕獲到芯片上。芯片質(zhì)量增加， QCM的響應(yīng)信號(hào)得到放大，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)靶DNA的高靈敏檢測(cè)。
　?、翘岢隽俗越M裝雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)放大的石英晶體微天平檢測(cè) DNA的新方法。將自組裝雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)與生物催化沉淀技術(shù)相結(jié)合，增大了芯片表面的質(zhì)量，提高了檢測(cè)靈敏度。通過芯片結(jié)合的靶DNA引發(fā)雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，進(jìn)一