加工方法對(duì)轉(zhuǎn)Bt抗蟲水稻內(nèi)外源DNA降解作用的研究.pdf

1、隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的快速發(fā)展，越來(lái)越多的轉(zhuǎn)基因作物進(jìn)入商品化階段，轉(zhuǎn)基因作物和其加工制品已進(jìn)入人們的日常生活，隨之對(duì)人類以及生態(tài)環(huán)境的影響備受公眾關(guān)注。本文以轉(zhuǎn)Bt抗蟲水稻“華恢1號(hào)”為原料，采用不同加工方法，研究其內(nèi)外源DNA在加工過(guò)程中的降解變化，以利相關(guān)檢測(cè)方法的建立，為今后我國(guó)轉(zhuǎn)基因水稻加工制品的檢測(cè)監(jiān)管提供科學(xué)依據(jù)和技術(shù)支持。
　　PCR方法定性研究不同加工方法對(duì)轉(zhuǎn)Bt抗蟲水稻的內(nèi)外源DNA的降解作用。以轉(zhuǎn)Bt抗蟲水稻“華恢

2、1號(hào)”及其陰性對(duì)照“明恢63”為原料，選擇煮制、高壓煮制處理、米果加工和米酒發(fā)酵等加工方法，并針對(duì)內(nèi)源基因（SPS基因）、外源基因或元件（包括actin1啟動(dòng)子、Cry1Ab/Ac基因、外源基因3'端接合序列、NOS終止子）設(shè)計(jì)不同擴(kuò)增片段大小的引物，PCR擴(kuò)增后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。結(jié)果表明:不同形式的加工方法對(duì)水稻的內(nèi)外源DNA產(chǎn)生了不同程度的降解作用。高壓煮制處理對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻內(nèi)外源DNA的降解作用大于煮制;在米果加工中，經(jīng)過(guò)煮制

3、、一次干燥和二次干燥加工后，油炸處理對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻內(nèi)外源DNA的降解作用最大，隨后依次是焙烤和微波處理;在米酒加工中，經(jīng)過(guò)煮制對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻內(nèi)外源DNA降解后，米酒發(fā)酵過(guò)程并沒(méi)有使轉(zhuǎn)基因水稻內(nèi)外源DNA產(chǎn)生進(jìn)一步的降解;實(shí)驗(yàn)中長(zhǎng)度小于200 bp的擴(kuò)增片段在所有加工過(guò)程中均可以被檢測(cè)出，具有較高的穩(wěn)定性。
　　熒光定量PCR方法定量研究不同加工方法對(duì)轉(zhuǎn)Bt抗蟲水稻的內(nèi)外源DNA的降解作用。在定性研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)與分

4、析。結(jié)果表明，試驗(yàn)中長(zhǎng)度小于200 bp的擴(kuò)增片段在加工過(guò)程也會(huì)發(fā)生不同程度的降解。不同加工處理對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻內(nèi)外源DNA產(chǎn)生了不同程度的降解作用，對(duì)于SPS基因、actin1啟動(dòng)子、Cry1Ab/Ac基因、外源基因3'端接合序列、NOS終止子，油炸處理的降解率分別為99.9％、99.9％、99.8％、99.8％、99.9％;焙烤處理內(nèi)外源DNA的降解率分別為98.4％、98.7％、98％、97.9％、98.2％;微波處理內(nèi)外源DNA降解

5、率分別為86.1％、89.5％、88.7％、84.1％、89.3％;酒釀處理內(nèi)外源DNA的降解率分別為75.6％、79.5％、77.2％、74.5％、77.1％?？梢钥闯鰧?duì)轉(zhuǎn)基因水稻內(nèi)外源DNA的降解作用由大到小，依次為油炸、焙烤、微波、酒釀發(fā)酵。高壓煮制處理對(duì)于相應(yīng)的內(nèi)外源DNA的降解率分別為74.9％、80.4％、77.5％、73.8％、77.5％。普通蒸煮對(duì)于相應(yīng)的內(nèi)外源DNA的降解率分別為74.4％、77.6％、76.1％、73