基于蛋白質反式剪接在大腸桿菌中重組鱟C因子Sushi多肽.pdf

1、細菌內毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁外層上特有的結構，其化學成分為脂多糖（LPS）。細菌內毒素可引起人體發(fā)熱、休克甚至死亡，但它又普遍存在且不易滅活，對制藥和醫(yī)療器械行業(yè)是一個挑戰(zhàn)，臨床上也有必要應用可靠靈敏的內毒素檢測試劑來避免內毒素帶來的不良反應。
　　鱟試劑（LAL/TAL）是國際上至今為止檢測內毒素最好的方法，具有簡單、快速、靈敏度高等特點，可檢測出fg（10-15g）級水平的內毒素，已被廣泛用于藥物，外科器械、水和食品中內毒素

2、檢測。然而由于近年來日益廣泛的鱟資源應用，再加上海洋環(huán)境污染等原因，鱟資源瀕臨枯竭，迫切需要開發(fā)鱟試劑的替代品。
　　基因工程成為開發(fā)鱟試劑首選的研究平臺，但由于細菌壁含有內毒素，最經濟實用的大腸桿菌系統(tǒng)不容易被利用，蛋白質內含子介導的蛋白質剪接技術應運而生，存在于前體蛋白質中的內含子會在蛋白質翻譯后發(fā)生自我剪切，并以天然肽鍵連接兩側蛋白質外顯子形成成熟的蛋白質。
　　鱟C因子是鱟血細胞中一種對內毒素具有高親和力的絲氨酸蛋白

3、酶原，可替代鱟試劑用于內毒素檢測。鱟C因子N端CES片段中的Sushi區(qū)域是與內毒素結合的關鍵部位。本文主要介紹了運用蛋白質反式剪接的新技術重組表達鱟C因子Sushi多肽，在特定位點斷開鱟C因子中能與內毒素結合的功能片段，分別連接到斷裂蛋白質內含子Ssp DnaX的N端片段(IN)和C端片段(IC)在大腸桿菌中表達，表達產物經親和層析純化，復性以及內毒素去除后，體外誘導該蛋白質內含子發(fā)生剪切，得到C因子中CES12片段，并檢測其活性。實