擬南芥MYB轉(zhuǎn)錄因子AtMYB50與AtMYB61互作及其在調(diào)控鉛耐受性中的作用.pdf

1、食品安全是食品行業(yè)的重中之重，而重金屬污染是威脅食品安全的主要因素之一。土壤污染重金屬可通過植物吸收進入食物鏈進而對人類的健康造成了極大的威脅。因此，利用轉(zhuǎn)基因技術降低農(nóng)作物對土壤污染重金屬的積累具有重要的理論意義和實踐價值，而此項工作的重點在于對植物耐受重金屬毒害及其積累的分子調(diào)控機理的認識。
　　在前期研究中，我們發(fā)現(xiàn)兩個涉及植物對鉛（Pb）脅迫耐受的調(diào)控基因AtMYB50和AtMYB61。這兩個基因是MYB轉(zhuǎn)錄因子家族中的R

2、2R3亞類成員，具有非常近的親緣關系。初步研究表明，AtMYB50和AtMYB61基因可能通過負調(diào)節(jié)一個編碼Pb特異性離子泵的基因AtPDR12轉(zhuǎn)錄進而控制Pb的積累來調(diào)節(jié)Pb脅迫的耐受性。因此，我們推測：AtMYB50和AtMYB61對Pb脅迫耐受的調(diào)節(jié)是否形成異源二聚體直接調(diào)控下游靶基因AtPDR12轉(zhuǎn)錄。本研究主要研究結果如下：
　　（1）利用酵母雙雜交技術對AtMYB50和AtMYB61蛋白是否具有相互作用進行研究：構建了

3、pEG202-AtMYB50、pJG4-5-AtMYB50、pEG202-AtMYB61、pJG4-5-AtMYB61四個酵母雙雜載體。在AtMYB50作為誘餌蛋白AtMYB61為靶蛋白和AtMYB61作為誘餌蛋白AtMYB50為靶蛋白的情況下都檢測到報告基因的表達，證實了AtMYB50和AtMYB61兩者存在相互作用。
　?。?）在酵母雙雜系統(tǒng)中，AtMYB50和AtMYB61兩個蛋白作為轉(zhuǎn)錄因子沒有激活下游報告基因，表明AtM

4、YB50和AtMYB61可能是轉(zhuǎn)錄抑制因子。
　?。?）為進一步驗證兩者之間的相互作用，我們還構建了AtMYB50和AtMYB61的原核表達載體，并進行表達獲得了AtMYB50和AtMYB61融合蛋白，為進一步利用pulldown技術驗證其體外相互作用的提供了基礎。
　?。?）為確定AtMYB50和AtMYB61是否直接與AtPDR12基因啟動子結合，構建帶有AtMYB50－GFP和AtMYB61－GFP的轉(zhuǎn)基因株系，為進一