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文檔簡介
1、脂肪酶是一種特殊的酯鍵水解酶，它可作用于甘油三酯的酯鍵，使甘油三酯降解為甘油二酯、單甘油酯、甘油和脂肪酸，還能催化水解脂、進行酯交換、酯合成等反應，廣泛應用于油脂加工、食品、醫(yī)藥、日化等工業(yè)，是重要的工業(yè)用酶之一。低溫堿性脂肪酶可在低溫與常溫下較好地發(fā)揮活性，在洗滌劑工業(yè)有良好的應用前景。本課題對實驗室保藏的脂肪酶產生菌株Acinetobacter johnsonii G23的發(fā)酵培養(yǎng)基進行了優(yōu)化，使其更適合后期的分離純化，并采用離子交
2、換層析對A.johnsonii G23產脂肪酶進行了分離純化，優(yōu)化了該脂肪酶純化工藝條件，并得到相關純化酶，為獲得其氨基酸序列以及其定向改造和構效關系研究奠定了基礎，同時還研究了該脂肪酶的基本酶學性質，并通過離子誘變的手段提高菌株產酶活力。
對A.johnsonii G23優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基成分為(w/v):可溶性淀粉1％、大豆蛋白胨1.5％、K2HPO40.4％、MgSO40.04％、CaCl20.05％、PVA-大豆油2％
3、、pH8.5。同時對A.johnsonii G23所產脂肪酶進行了分離純化，發(fā)酵液經過離心、抽濾、硫酸銨沉淀、透析、超濾管濃縮、Hitrap Q HP陰離子交換層析等步驟處理后，SDS-PAGE電泳確定酶分子量為40kDa左右，比活力達90.25U/mg，純化倍數達29.59倍，回收率達到13％。A.johnsonii G23所產脂肪酶酶學性質研究顯示確定該脂肪酶最適作用溫度是25℃，最適作用pH為8.0，屬于低溫堿性脂肪酶;熱穩(wěn)定性和
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